酵母菌四分体的制备与剖分实验
| 实验材料 | |
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| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1a. Glusulase酶处理：用无菌水洗涤孢子3次，再用5 ml 无菌水重悬并取30 μl 稀释在270 μl 无菌水中。在光学显徽镜下观察细胞，检测完整的子囊，加3 μl 稀释的Glusulase酶到孢子制备液中，用旋涡混合器轻轻振荡混匀，室温温育2 min，然后在显微镜下观察细胞，继续于室温温育，直到Glusulase酶处理完全。
1b. 酵母裝解酶-100T处理：细胞用50 μl 酵母裂解酶-100T溶液重悬。在光学显微镜 下观察完整的子囊。30℃温育10 min，沿试管壁缓缓地加入0.8 ml 无菌水。
2. 将消化管置于冰浴中，用接种环蘸取处理过的孢子在YPD剖分平板表面划两条平行线。
4. 固定平板，使平板上的划线与平台的x轴平行，选择一个独立的四分体，聚焦并定位在视野中心。使用粗调旋钮向上调整解剖针的位置，当操纵杆推至约一半时，针头接触到平板的表面。
6. 移动平板，将针定位在离划线处1 cm 的位置并垂直于四分体孢子的划线，轻轻地将针头接触到琼脂的表面并置四分体于平板上，在操作过程中可能发生以下情况：
（2）平板上只有1个孢子，沿x轴移动约0.5 cm 重复步骤6。
7. 用x轴和y轴的控制旋钮将平板移回使解剖针可直接在经过处理孢子的划线的正下方，重复步骤5和6，将毎个四分体孢子按一定间隔点在同一条直线上，位于原四分体所在直线的1 cm 处，并与之平行。
9. 继续重复步骤5~8，直到沿x轴的所有位置均点满剖分四分体，将平板转动180。， 从平皿另一侧对应的划线上剖分其他四分体。平板的每一侧可剖分13个四分体。 展开 |
| 其他 |
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