NA & RNA 寡聚核苷酸的准确分子质量测定（三）

与低分辨的实验相比，在保持上样量和色谱条件不变的前提下，仅仅改变质谱采集的分辨率，可以看到寡聚核苷酸的色谱保留时间不变，基本在 3.52 min 出峰，不过随着质谱检测器分辨率的提高，原始质谱图发生了显著的变化，如下所示，当使用线性离子阱 LTQ 作为质量检测器时，只检测到一个大包峰，无法分辨电荷；当使用 Orbitrap 作为质量检测器，分辨率 R 设置为 15000 时，同样也只检测到一个大包峰，电荷仍然无法分辨；当使用 Orbitrap 作为质量检测器，分辨率 R 设置为 30,000 时，可以观察到一些同位素峰，电荷可以实现分辨；当使用 Orbitrap 作为质量检测器，分辨率 R 设置为 60,000 时，可以观察到稍微好一些的同位素峰，但无法完全分离，电荷同样可以实现分辨；当使用 Orbitrap 作为质量检测器，分辨率 R 设置为 120,000 时，同位素峰可以实现完全分离，电荷同样也可以实现分辨；当使用 Orbitrap 作为质量检测器，分辨率 R 设置为 240,000 时，同位素峰可以实现完全分离，并且峰形更加尖锐，电荷同样也可以实现分辨，由此我们可以准确的计算得到寡聚核苷酸的单同位素质量和平均质量，最后的实验结果与理论预测的分子质量保持完全一致。

同样，我们对几个不同分子质量的寡聚核苷酸进行了不同分辨率的质谱测试，结果如下所示：

从上面的质谱图中，可以看到，随着质谱分辨率的提高，寡聚核苷酸的同位素峰可以实现完全分离，并且峰宽更窄，电荷也可以实现完全分辨，并且无需软件辅助，就可以直接计算得到寡聚核苷酸的单同位素质量和平均分子质量，使得寡聚核苷酸的分析测试更加快速和直接。

4. 结论

本文通过 LTQ-Orbitrap Elite 质谱建立了寡聚核酸药物分子质量分析的色谱质谱在线方法，可以在核酸药物的研发分析和实时生产检测中，更加有效、灵敏、快速和精确的测定寡聚核苷酸的分子质量。实验结果表明 LTQ-Orbitrap Elite 组合式质谱仪，凭借其超高的分辨率，超快的扫描速度，超高的质量精度、超低的灵敏度和超大的动态范围，极大地完善和推动了基因药物的鉴定分析。