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液相色谱仪检测冬葵果含量

2020.7.14

(1)本品宿萼表面观:下表皮星状毛由2~8个(多由4~8个)细胞组成,单个细胞长50~1140µm,直径约75µm,壁稍厚;腺毛头部椭圆形,5~7个细胞,直径25~38µm。上表皮单细胞非腺毛细长,弯曲或平直,长约至1190µm,壁薄或稍厚。上下表皮气孔均为不等式。叶肉薄壁细胞含草酸钙簇晶,直径6~25µm,棱角较尖。

本品果皮横切面:外果皮为一层长方形表皮细胞,壁稍厚,外被角质层。中果皮由2~3层类圆形薄壁细胞和一层含草酸钙棱晶的细胞组成,薄壁组织中有大型黏液细胞散在。含晶细胞类圆形,壁厚且木化。薄壁组织中有大型黏液细胞散在。中果皮与内果皮间有10余束纤维束,呈环状排列。内果皮为一列径向延长的石细胞,呈栅栏状,侧壁及内壁甚厚,木化。

本品粉末淡棕黄色;外果皮表皮细胞表面观呈长条形,果皮细胞中含众多草酸钙棱晶。色素层细胞类圆形,内含红棕色物质。栅状细胞碎片无色,为1列长柱形细胞,壁极厚,中间可见胞腔。

(2)取本品粉末2g,加水20ml,振摇15分钟,滤过,滤液加活性炭1g,置水浴上加热15分钟,滤过,取滤液2ml,加碱性酒石酸铜试液4滴,置水浴上加热5分钟,生成棕红色沉淀;另取滤液2ml,加10%-萘酚乙醇溶液3滴,摇匀,沿管壁加硫酸0.5ml,两液接界处显紫红色环。

(3)取本品粉末1g,置圆底烧瓶中,加70%乙醇加热回流2小时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇10ml使溶解,取上清液2ml通过C18小柱,用蒸馏水5ml洗脱,收集蒸馏水洗脱液作为供试品溶液。另取咖啡酸对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取供试品溶液20µl、对照品溶液4µl,分别点于同一聚酰胺薄膜上,以甲醇-水-冰乙酸(3:2:0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。

【检查】水分  不得过10.0%(附录Ⅸ H第一法)。

总灰分  不得过11.0%(附录Ⅸ K)。

【含量测定】对照品溶液的制备  精密称取咖啡酸对照品适量,加无水甲醇制成每1ml含0.03mg的对照品溶液,即得。

标准曲线的制备   精密吸取咖啡酸对照品溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml和4.0ml,置25ml量瓶中,加无水乙醇至5ml,加0.3%十二烷基硫酸钠2.0ml及0.6%三氯化铁-0.9%铁氰化钾(1:0.9)混合溶液1.0ml,混匀,在暗处放置5min,加0.1mol/L盐酸溶液至刻度,在暗处放置20min,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(附录ⅤA),在700nm波长测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。

测定法  精密称取本品粉末2.5g,置圆底烧瓶中,加70%乙醇50ml,加热回流提取2小时,滤过,用70%乙醇20ml分两次洗涤容器,洗液并入同一圆底烧瓶中,40℃减压回收溶剂至近干,加适量无水甲醇溶解,并转移至25ml量瓶中,用无水甲醇稀释至刻度。精密量取5.0ml置10ml量瓶中,加无水甲醇稀释至刻度,摇匀,避光备用。精密量取0.5ml,置25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加无水乙醇至5ml”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中含咖啡酸的量,计算,即得。

本品按干燥品计算,含总酚酸以咖啡酸(C9H8O4)计不得少于0.15%。


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