核糖核酸酶（胰腺）的测定

实验方法原理

RNaseⅠ

分解 RNA 形成 3'-磷酸单核苷酸和 3'-磷酸多核苷酸，以 Cp 或 Up 结尾形成一个 2'，3'-环状磷酸中间体。

实验材料 酶样品

试剂、试剂盒 乙酸缓冲液乙酸铀酰-高氯溶液RNA（酵母）溶液核酸核酸酶

仪器、耗材 分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.6 ml 1％ RNA 溶液

0.1 ml 酶（向空白对照中加入约 1.0 ml 0.1 mol/L 乙酸缓冲液，pH 5.0）

37℃ 培养 4 min，停止反应要加入 0.3 ml 乙酸铀酰-高氯溶液冰上

防止 5 min，离心 5 min，然后稀释 0.1 ml 上清液与 0.9 ml H2O

测量 260 nm 处增加的吸收值。

计算

1 个单位被定义为：在上述的条件下，37℃、pH 5.0 时，引起吸收值变化 1.0 的酶量。

注意事项

其他

试剂：

0.1 mol/L 乙酸缓冲液，pH 5.0（5.7 ml 乙酸，100％，Mr＝60，溶于 800 ml 水中，用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 4.0，补充至 1 L）

乙酸铀酰-高氯溶液（0.75％ 乙酸铀酰溶于 25％ 高氯溶液）

RNA（酵母）溶液（50 mg/10 ml 溶于 0.1 mol/L 乙酸钠缓冲液 pH 5.0）核酸核酸酶（1 mg/ml，使用前在 0.1 mol/L 乙酸钠缓冲液 pH 5.0 中稀释 100 倍）