实验室HIV检测技术概述及进展（四）
2.2.6 连接酶酶促链式反应(LCR)
LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种探针扩增技术，是继PCR后新发展的一种较有前景的体外扩增技术。它的原理就是由2段寡核苷酸单链DNA探针与目标序列杂交，当该2段DNA探针与没有发生突变的模板褪火后，如果2探针是紧邻的，中间没有核苷酸间隔，则可在连接酶作用下连接起来，连接以后的新链又可以作为模板，引导下一周期的连接产生新的子链。若连接区段发生核苷酸的碱基突变，则连接反应不能发生，扩增反应终止。
3、目前检测技术的不足
细胞培养的方法检测HIV专一性强，不会出现假阳性，对于确认那些抗原/抗体检测不确定的个体和阳性母亲新生儿是否感染HIV有着重要的意义。但是须要有一定数量的感染细胞存在才能培养和分离出病毒来，因而敏感性差、操作时间长、操作复杂，必须在特定的P3实验室中才能进行，且费用较高(每次培养需要约200～500美元)，不适用于临床。
p24抗原检测能够在病毒开始复制后检测到血液中的可溶性p24抗原，但易出现假阳性。因此，阳性结果必须经中和试验确认，该结果才可作为HIV感染的辅助诊断依据。HIV 1 p24抗原检测阴性，只表示在本试验中无反应，不能排除HIV感染。
病毒核酸检测方法具有很高的灵敏度，对疾病进展的监测、抗病毒疗效观察和耐药性监测非常重要。但是，由于HIV基因的多样性，没有一套引物可以覆盖所有的HIV序列，使检测的敏感性又受到限制；此外现有的病毒核酸检测方法或是检测仪器、检测试剂昂贵，或是操作复杂，对操作人员要求高，既难以在一般实验室推广，又不适用于对大量患者的快速检测，同样不适合广泛的临床应用。
因此，既要提高检测的敏感性、特异性，缩短窗口期，又要简便、快速和降低成本已成为HIV检测技术发展的要求和方向，很多的研究正致力于寻找病毒检测的替代技术。
4、HIV检测技术的进展
近年来，HIV检测技术取得了很大进展。如发展了ICD p24抗原测定法(immunecomplex
disassociate，免疫复合物解离，ICD)、第四代HIV检测试剂、超敏感EIA、线性免疫酶测定(lineal
immunoenzymatic assay)等，使检测出HIV感染的时间大大提前。
4.1 HIV检测试剂的发展
从1985年第1代HIV抗体检测试剂问世到现在，HIV血清学检测试剂已经发展到了第4代。第4代ELISA试剂的优点在于能同时检测抗原和抗体，降低血源筛查的残余危险度。与第3代抗HIV
1/2试剂相比，检出时间提前了4～5d，窗口期缩短了1周多，在对艾滋病早期诊断的效果上明显优于第3代。
但使用第4代试剂对艾滋病毒进行检测，仍然有2～3周的窗口。此外，由于把抗原和抗体同时包被在反应板上，存在着相互干扰的可能，影响了免疫反应的特异性。而且由于第二窗口期的存在，也使得检测的敏感性受到影响。一般来讲，使用第4代试剂检测p24抗原，其灵敏度(20～100
pg/mL)远远低于单独检测抗原抗体分析法(3.5～10
pg/mL)。从方法学上来讲，这种基于ELISA的分析方法，灵敏度终归是有限的。相对化学发光和时间分辨荧光免疫分析技术等更先进的分析方法，它的灵敏度比较低。由此可见，提高敏感性、特异性、缩短窗口期和简便快速是HIV检测试剂未来发展的主要趋势。
4.2 病毒检测方法的发展
4.2.1 核酸检测方法研究进展
随着分子生物学技术的发展，核酸检测越来越受到人们的重视并将其与抗原抗体反应的高特异性结合起来形成了免疫PCR技术。这一技术具有特异性强和灵敏度高的特点，可用于单个抗原的检测。这促进了应用PCR技术进行HIV核酸检测的快速发展。自2001年起，COBAS Ampliscreen HIV 1 Test等4种HIV核酸检测技术通过了FDA的批准，作为进筛选分析技术来进行HIV 1的检测。最近，实时荧光PCR检测技术的应用使HIV核酸检测技术又进入到一个新境界。通过这种技术，不但可以进行定性检测，更重要的是可以进行定量检测。Barletta等将这一技术应用到HIV的检测中，大大降低了病毒载量的检测限(0.66个拷贝相当于0.33个病毒粒子)。2002年4月国家药品监督管理局(SDA)批准了第一个HIV荧光PCR检测试剂盒。
