实验室分析仪器--液相色谱仪器日常维护及注意事项
1.液相色谱中对流动相的要求
①溶剂必须“干净”,在使用前需经过滤板除去颗粒杂质,必要时,在进样口再加一滤板,以除去可能由泵带来的颗粒。
②必须控制吸附色谱中溶剂的含水量,过量水会使吸附剂活性降低,溶质保留值下降。
③如需在一定pH值下操作,需定期测定流动相的pH值,大气中的CO2溶解在流动内将引起pH值的变化,特别是储液瓶密闭不严时这种影响的可能性更大。
④软质或半软质填料的溶胀率随溶剂极性的变化而变化,使用新柱时应先用25~30铝柱容积的合适流动相平衡;更换流动相时,如果两种流动相互不相溶,需采用过渡溶剂使前一种流动相逐步溶解除去(例如,2,2,4—三甲基成烷换成甲醇时,必须用乙酸乙酯或其他溶剂过渡,直到标准物保留值达到稳定状态)
⑤为延长不易装填、价格昂贵的高效柱寿命,可在进样器和色谱柱之间安装顶柱(顶柱应有足够的杂质容量),对流动相和样品中的颗粒和杂质进行最后的过滤;在填充和连接柱时,不应有额外造成谱带变宽、分离度下降的死体积;顶柱与色谱柱的体积之比应保持为1:15至1:25,以减少谱带变宽。
2.液相色谱柱的日常维护
①拿到一根新色谱柱时,先看使用说明书,再测柱效,保留在新色谱柱上测得的色谱图,并记录条件,并定期检测柱效和检测仪器的谱带展宽。
②每次开机时,流速和柱压要逐渐增加,突然迅速増加会使柱床受到冲击,引起紊乱,产生空隙。
③在进样前使色谱系统充分平衡,是否平衡可由基线加以判断。
④在进样前,检査色谱系统的各个接头,通常由此发现是否有漏液现象。如有漏液,空气会从漏缝进入系统引起基线漂移、影响峰高和峰面积的重复性。
⑤不要把柱接头上得太紧,否则易损坏接头螺纹,引起渗漏。
⑥不要把柱子放在有气流的地方或直接放在阳光下,气流和阳光会使柱子产生温度梯度,造成基线漂移;如果怀疑基线漂移是由温度梯度引起的,可以设法使柱子恒温。
⑦若仪器用作常规分析,样品种类有限,但分析次数很多,则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱,这样有助于延长柱寿命。
⑧样品的前处理问题:待测样品要先除去微粒及杂质;了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相,一定要用流动相试溶解度,防止其在流动相中析出;了解样品与色谱柱的基质填料是否相互作用。
⑨流动相选择问题:流动相使用的溶剂必须是 HPLC及试剂,必须过滤除去微粒:使用超纯水,水中有机杂质含量要低;缓冲液的pH值和浓度在填料的允许范围内:流动相对样品要有一定的溶解度;有机溶剂或水的比例要符合色谱柱所允许的使用范围,如普通Cs柱要求有机相比例≥5%。
⑩如果怀疑样品会污染色谱柱,可以用合适的试剂(几百毫升)慢慢冲洗柱子过夜第二天早晨再用流动相重新平衡柱子(约3min)。
!1、如果条件允许,可以给色谱柱加装一些在线保护装置,如在线过滤器、保护住等,这些都可大大延长色谱柱的使用寿命。
!2、柱要加标签,新旧分开,柱效高的色谱柱用来分析含量高的杂质少的样品,柱效差的
可分析含量低杂质峰多“脏”的样品,不要放在温度变化很大的地方。
!3、柱子不用或储藏时,存放前先除去杂质、盐;选择合适的存放溶剂,避免色谱柱床的干枯;避免机械震动;防止细菌生长;注意存放的温度。
3.色谱分析中蒸馏水的处理
水为液相色谱中最常用的溶剂,其中的有机杂质种类和处理方法见表1。
表1 水中的有机杂质种类及处理方法
杂质种类 | 来源 | 预防方法 |
菌类 | 细菌在清洗盛水的容器中生长(添加保护剂可避免或抑制细菌,但太多会干扰色谱过程,尤其不利于紫外检测) | 使用棕色瓶避免光保存水 把水放在冰箱里,可抑制细菌的生长。 直接把水的θ=10%(或15%)的有机溶剂混合储存,这种混合液体可直接用作反相色谱的冲洗剂 |
制造盛水容器的材料 | 塑料中的某些组分会扩散进入水里,影响梯度操作,污染柱子 | 采用玻璃或金属容器;玻璃容器中的金属离子也有可能从表面浸析出来,但没有有机杂质污染严重 |
挥发性有机杂质 | 一些有机杂质很难蒸馏彻底 | 让水通过50cm的C18多孔硅胶柱,有机杂质在柱内保存,由此而除去 |
