可溶性表达的蛋白如何纯化？纯化后如何除咪唑？
1，破细胞，高速离心收上清收集上清（同时平衡好柱子）；
2，既然你是His-tag，用Ni-NTA之类的柱子，两次上柱，buffer平衡；
3，低浓度咪唑（5mM）洗5-10柱体积，以洗去杂蛋白；
4，过梯度咪唑（10-500MM），用紫外检测仪监测280nm，收下每个峰；
5，用峰液跑SDS-PAGE，看哪个峰的蛋白浓度和纯度最为理想；
6，脱咪唑以及换buffer、脱盐，有两种基本方法：A，透析（经济、简便）；B，用脱盐柱（需要有仪器及柱子，更简便更省时）。
关于您说的蛋白没有活性的问题，我建议您在脱咪唑之前，就用峰液去测活性（如果咪唑不影响活性的检测手段），一般来讲，咪唑不会对蛋白的活性有太大影响。如果脱咪唑之前就已经没有活性，那就不是脱咪唑的问题，而是要往前追溯问题。比如，有无移码、tag对蛋白性质影响如何、破细胞的方法是否影响蛋白等等。
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