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带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题

2023.2.14

1.
蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性,其次和保存条件优化有关;
2.
尽量避免蛋白的反复冻融,这会对蛋白的结构和活性造成破坏;
像你说到的第二天就要用,根本没必要放在-70℃低温,一般来讲,尽量安排好实验周期,在3天内用完蛋白(4℃保存)是理想条件;
3.
如果不得不保存,要分装,留下马上就用的放在4℃,其他放低温,每次取1只;如果有冻干机,冻成干粉再放到-70比液态低温更好,再溶解也会好很多(但很多蛋白还是会有失活问题);
4.
关于保护剂,如果蛋白稳定性不强,一般会加甘油(5%-50%浓度)和叠氮钠(抑菌),这样一来,取出时,不得不做透析或脱盐,以去除甘油和叠氮钠,会带来损失,相比而言,冻干粉就好很多;
5.
关于咪唑的去除问题,如果确信咪唑的存在对你后续的实验没影响,可以不去;但实际上,很多实验都会受到咪唑的影响,或者说一旦实验有疑问,你就无法判定是否是因为咪唑,所以建议你去咪唑,去咪唑的方式包括:透析、浓缩管离心、脱盐柱。个人认为,去除效率、最省时、蛋白回收率最高的办法是脱盐柱。

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