紫外可见分光光度法测定维生素B12含量
维生素[U1] B12是含钴的有机药物，为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺，是唯一含有主要矿物质的维生素。测定维生素B12片剂含量的传统方法是运用紫外可见分光光度计，以吸光系数法为测定含量依据，但是该方法对仪器精密度要求较高。标准曲线法是紫外可见分光光度法中最经典的方法，若认定一台仪器，固定[U2] 其工作状态和测定条件，则该方法可消除因仪器而产生的一些误差，且操作简便易行［1］。本文利用紫外可见分光光度计，建立了维生素B12片剂含量测定的标准曲线法，并利用该方法对山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂的5个不同批号进行了V-B12的含量测定，方法准确、简便、重复性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器
754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。
1.2 试药
维生素B12对照品（中国药品生物制品检定所）；维生素B12片剂（山西亨瑞达制药有限公司，批号060801，060701，061002，060902，070303）。0.8滤膜［AUTOMATIC SCIENCE（TIANJIN） INSTRUMENT CO；LTD］。
2 方法与结果
2.1 测定波长的选择
维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。
2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。
2.3 线性关系
标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。
表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略）
以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。见图1。
2.4 精密度试验
精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。RSD数值较小，说明该方法精密度好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。
表2 供试品溶液冷藏温度下24 h内测定值（略）
2.6 重复性试验
精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项下含量测定法测定，计算得维生素B12的平均含量为22.6 μg/mL（批号为070303），RSD为 1.08%（n=5），说明该方法有较好的重复性。
2.7 含量测定
以水为空白，取2.2.2项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。结果见表3。
表3 维生素B12片剂含量测定结果（略）
维生素B12片剂的标示量为25.0 μg，由以上测定结果可知，山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%～110.0%之内。RSD较小，说明该厂生产的药品含量稳定。
3 讨论
3.1. 维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中。在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血；促进儿童发育，增进食欲；增强体力；维持神经系统的正常功能；促使注意力集中，增强记忆力与平衡感。能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。维生素B12为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须［４］。主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议［５］。口服维生素B12仅用于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏［６］。
3.2 本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素B12的含量，将对照品按不同比例用水稀释，在361 nm波长处进行紫外可见吸收测定，得到标准曲线。将维生素B12片剂研磨，精密称定并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。利用该方法得到的样品溶液，按中国药典规定波长361 nm测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据，结果表明，经紫外可见吸收测定，所测片剂含量均在标示范围之内。
3.3 本实验需避光操作。维生素B12片剂为糖衣片，呈水溶性，除去糖衣时要刮净，研细，减小干扰，使溶解度增高。
3.4 因紫外可见分光光度法所需样品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到供试品溶液。
3.5 本方法简便、准确、灵敏度高，可作为测定维生素B12片剂含量的方法。
【参考文献】
［１］ 李发美.分析化学［Ｍ］.第5版.北京：人民卫生出版社，2003，6：210.
［２］ 中国药典2005年版［Ｓ］.二部.北京：化学工业出版社，2005：668～669.
［３］ 李发美.分析化学实验指导［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2004：98～99.
［４］ 杨宝峰，苏定冯.药理学［］Ｍ.第6版.北京：人民卫生出版社，2003，7：303～304.
［５］ 徐叔云.中华临床药物学［Ｍ］.下册.人民卫生出版社，2003，5：1 141.
［６］ 陆晓和.实用临床用药监护［Ｍ］.北京：人民卫生出版社，2003，10：384.
