淋巴细胞增殖实验
淋巴细胞增殖法对于（1）免疫学的研究（2）淋巴细胞的T细胞，吞噬细胞等的功能研究。
| 实验方法原理 | 淋巴细胞在体外经某种物质刺激，细胞代谢和形态相继变化，在24——48h细胞内蛋白质和核酸的合成增加，产生一系列增殖的变化，如细胞变化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等，由淋巴细胞转变为淋巴母细胞。因此，这种淋巴细胞增殖又叫淋巴细胞转化。据此可判断出淋巴细胞对有关刺激的反应性与功能状态。 （1） 非抗原性刺激物：如植物血凝素（PHA）、刀豆素A（ConA）、美洲商陆（PWM）、脂多糖（LPS），通称促有丝分裂原。其中LPS刺激B细胞，PWM可刺激T和B细胞，PHA和ConA刺激T细胞增殖。 （2） 抗原性刺激物：如结核菌素、葡萄球菌毒素、破伤风类毒素、链球菌激酶、肿瘤抗原、同种异型组织抗原等。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 基 本 方案 丝 裂原 诱 导 的 外 周 血 单 个 核 细 胞 增 殖 实 验材 料
备 选 方 案 1 单向混合淋巴细胞反应附 加 材 料（其他材料见基本方案）R P M I 完 全 培 养 基（R P M I -10A B ) (附录 1 ) : 含 1 0 % 人 A B 血清， 56°C ， I h 灭活 同种异体刺激细胞（P B M C ; 单 元 8.1) 自体刺激细胞（P B M C ; 单 元 8. 1) 丝裂霉素 C 溶 液 ， 0.5m g /m l ， R P M I -10A B 配 制（避 光 ，无沉淀），或细胞照射二活设备 |
| 注意事项 | 1. 细胞培养液终止前6h或18h，在每孔中加入20μL浓度为50μCI/ML的氘代TDR，可适当延长TDR渗入时间。 2. 根据仪器使用说明书彻底清洗细胞收集器 |
| 其他 | 使用全自动同步细胞收集器，洗涤，裂解细胞，并将DNA转移到滤纸上，且彻底洗掉为渗入的氘代TDR，100%甲醇洗涤滤纸条，使滤纸条易于干燥，使用半自动细胞收集器时，需将滤纸片放入对应的闪烁管中，人工收集时，将滤片置于灯下观察烘干，然后用镊子将滤纸加入对应的闪烁管中，最后在闪烁管中加入闪烁液。 |
