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冻存的细胞该如何开始培养?

2020.7.20

  ⑴将一管细胞从液氮罐中取出,注意保护手和眼睛。

  ⑵用10秒钟时间将小管的盖子拧松1/4以去除残留在螺纹处的液氮,然后将盖子盖紧。

  ⑶将小管放入37℃水浴中,轻轻握住并旋转,直到管内物体完全融化。

  ⑷将小管立即从水浴中拿出,擦干,转入无菌环境。

  ⑸用70%的酒精冲洗小管,然后擦去多余酒精。

  ⑹打开盖子,注意手指不要碰到里面的螺纹。用1ml离心管离心内容物。

  ⑺平衡管内物,用多聚赖氨酸包被培养瓶(多数细胞用T-75的培养瓶)。多数细胞类型推荐接种密度为每平方厘米5000细胞。

  ⑻盖好盖子,轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。

  ⑼将培养瓶放放培养箱中(37℃,5%CO2,95%空气)

  ⑽植入培养后第6-16小时更换一次培养基以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。


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