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培养基

2021.1.17

  培养基是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。适宜的培养基不仅可用于细菌的分离纯化培养、传代、菌种保存,还可用于研究细菌的生理、生化特性,是病原菌分离鉴定的重要环节和必不可少的手段。

  一、培养基的组成成分

  (一)营养物质

  细菌需要的基础营养物质应含有氮源、碳源、无机盐类和生长因子等,常用的营养物质如下:

   1.蛋白胨

  蛋白胨是制备培养基时最常用的成分之一,提供细菌生长繁殖所需要的氮源。

   2.肉浸液

  是用新鲜牛肉浸泡、煮沸而制成的肉汁。其中含有可溶性含氮浸出物(肌酸、黄嘌呤、腺嘌呤、谷氨酸、甘氨酸等)和非含氮浸出物(肝糖、乳酸、琥珀酸、磷酸己糖、脂肪、无机盐等)。还有一些生长因子。肉浸液可为细菌提供氮源和碳源,但肉浸液中所含氮物质过少而不能满足细菌的需要,因此在制备培养基时应再加入1%~2%的蛋白胨和0.5%NaCl。

   3.糖类、醇类

  为细菌生长提供碳源和能源。制备培养基所用的糖类、醇类有多种,常用的糖类有单糖(葡萄糖、阿拉伯糖等)、双糖(乳糖、蔗糖等)和多糖(淀粉、菊糖等);常用的醇类有甘露醇、卫茅醇等。除葡萄糖、蔗糖主要作为碳源和能源的基本成分外,其他糖类和醇类主要用于鉴定细菌所做的发酵反应。

   4.无机盐类

  提供细菌生长的各种元素,如:钾、钠、铁、镁、钙、磷、硫等。用于制备培养基的无机盐类有多种,其中最常用的有氯化钠和磷酸盐,前者对维持酶的活性、调节菌体内外的渗透压非常重要,后者是细菌良好的磷源,并在培养基中具有缓冲作用。

   5.生长因子

  是细菌生长所必需的,但需要量很小。在制备培养基时,常加入维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等生长因子。

  血液中可提供辅酶(如V因子)、血红素(X因子)等特殊生长因子,所以,在培养基中加入血液可用于培养营养要求较高的细菌。

  (二)凝固物质

  最常用的凝固物质为琼脂,特殊情况下也可用明胶、卵白蛋白、血清等。

  琼脂是从石花菜中提取出来的一种多糖,在45℃以下则凝固成凝胶状态,是一种理想的固体培养基赋形剂。因其不被细菌分解利用,故无营养作用。

  (三)抑制剂和指示剂

   1.抑制剂

   抑制剂必须具有选择抑制作用,在制备培养基时加入一定种类的抑制剂,目的在于抑制非检出菌(非目的菌)的生长,以利于检出菌(目的菌)的生长。抑制剂的种类很多,可根据不同的目的选用不同的抑制剂。

   2.指示剂

   在培养基中加入一定种类的指示剂,是为了便于观察细菌是否利用和分解培养基中的糖、醇类。常用的有酚红、中性红、甲基红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国蓝等酸碱指示剂。亚甲蓝常用作氧化还原指示剂。

   二、培养基种类

   1.基础培养基

   含有基础生长所需的基本营养成分,最常用的是肉浸液,俗称肉汤,主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。基础培养基广泛用于细菌的增菌、培养,也是制备其他培养基的基础成分。

   2.营养培养基

   在基础培养基中可加入葡萄糖、血液、生长因子等特殊成分,供营养要求较高的细菌的细菌生长。

   3.鉴别培养基

   利用细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同,在培养基中加入特定的作用底物和指示剂,观察细菌生长过程中分解底物所释放的不同产物,通过指示剂的反应不同来鉴别细菌。例如糖发酵管、克氏双糖铁琼脂(KIA)、伊红-亚甲蓝琼脂和动力-吲哚-尿素(MIU)培养基等。

   4.选择培养基

   在培养基中加入抑制剂,去抑制标本中的杂菌生长,有助于目的菌的生长。例如培养肠道致病菌的SS琼脂,其中的胆盐能抑制革兰阳性菌,枸橼酸钠和煌绿能抑制大肠埃希菌,因而使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到。

   5.特殊培养基

   包括厌氧培养基和细菌L型培养基等。前者是培养专性厌氧菌的培养基,除含营养成分外,还加入还原剂以降低培养基的氧化还原电势,如疱肉培养基、巯基乙醇酸钠培养基等。后者是针对细胞壁缺损的细菌L型,由于胞内渗透压较高,故培养该菌时必须采用高渗(3%~5%NaCl、10%~20%蔗糖等)低琼脂培养基。

  三、分离培养基

   1.血平板:适于各类细菌的生长,一般细菌检验标本的分离,都应接种此平板。

   2.巧克力血平板:其中含有V和X因子,适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。血液中有V,X因子是位于红细胞中的,一般细菌不能利用,轻微的加热使红细胞破坏释放到细胞外方可利用。

   3.中国蓝或伊红亚甲蓝平板:可抑制革兰阳性细菌,有选择地促进革兰阴性细菌生长,因分解乳糖能力不同,在此平板上菌落颜色不同。

   4.麦康凯平板:具中等强度选择性,有少数革兰阴性菌不生长。在麦康凯平板上能否生长,是非发酵菌鉴定的一个依据。

   5.ss琼脂:有较强的抑菌力,用于志贺菌和沙门菌的分离。

  6.碱性琼脂或TCBS琼脂:用于从粪便中分离霍乱弧菌及其他弧菌。

   7.血液增菌培养基:用于从血液、骨髓中分离常见病原菌。

   8.营养肉汤:用于一般细菌的增菌培养。


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