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DNA聚合酶的应用

2022.5.07

E.coli的DNA pol Ⅰ涉及DNA损伤修复,在半保留复制中起辅助的作用。DNA polⅡ在修复损伤中也具有重要的作用。DNA polⅢ是一种多亚基的蛋白质,在DNA新链的从头合成中起复制酶的作用。

复制的忠实性问题会影响到翻译的精确性,这种忠实性主要依赖于碱基的特异性配对。据估计每个碱基对将有10-3。的概率会发生错配,但实际的错配率只有10-8~10-10,即每1000个细菌复制周期中,每个基因组只产生一次错误。DNA多聚酶能增加互补碱基的特异性,该特异性主要表现在以下两方面: 

①能够检查进入的碱基是否和模板互补,这时通过一个匹配的化学特点加以识别,这是合成前的一种预防措施,称为合成前( presynthetic)错误控制; 

②在新的碱基加到链上以后,检查碱基是否配对。若发生错配,将会把刚加上去的错误碱基切除掉,这是校正控制( proofreading)。 

细菌的三种DNA聚合酶都具有3 7硝’外切活性,逆DNA合成方向进行加工,提供校对功能。在链的延伸阶段中,一个核苷酸进人生长链的末端,形成键,该酶就向前移一个碱基对,准备下一个碱基对的进入。若一个错误产生了,这个酶就向回退,切除最后加进来的这个碱基,产生一个位点,然后被正确的碱基取代。 

不同DNA多聚酶聚合和校正之间的关系是不同的。有时,这些活性是由相同的蛋白质亚基产生的,但有时它们又还有不同的亚基。一个错误碱基的排除实际上是十分复杂的,因为这种切除反应是由不同位点催化的。

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