假单胞菌属及其检验
一、介绍
椰毒假单胞菌酵米面亚种（Psedomonas cocovenenans supsp.farino
fermentans)是我国发现的一种新的食物中毒菌，它存在于发酵的玉米、糯玉米、黄米、高梁米、变质银耳以及周围环境中，它是酵米面及变质银耳中毒的病原菌。该菌产生的毒素米酵菌酸是其致病原因。
该食物中毒的主要症状，开始患者感到上腹部不适，少数出现腹泻、恶心、呕吐，呕吐物多为咖啡色，严重者出现黄疸。昏迷、四肢抽搐、少尿、血尿、便血和尿潴留，呈现休克而死亡。目前尚无特效的治疗办法。
该菌为革兰氏阴性杆菌，长2.5-3μm，宽0.5-1.0μm，呈杆状、球杆状或稍弯曲，两端钝圆，无芽胞，有鞭毛。
本菌为兼性厌氧，但易在表面生长。最适生长温度为37℃，最适产毒温度为26℃。pH5-7范围内生长较好。
本菌抵抗力较弱，56℃5分钟即可杀死，对各种常用消毒剂抵抗力也不强。
二、检验方法：
样品先在GVC增菌液中进行增菌，然后划线接种于PDA平板，挑选可疑菌落进行革兰氏染色观察及氧化酶试验。如为革兰氏阴性小杆菌，氧化酶试验阴性，再接种于卵黄琼脂平板和SS平板。
从卵黄琼脂平板上挑取卵磷脂酶阳性、并带有彩虹环的单个菌落，接种于马铃薯－葡萄糖琼脂斜面，获得纯培养物。
将纯培养物分别接种于 Hugh-Leifson培养基，蛋白胨水，缓冲蛋白胨水，西蒙氏柠檬酸盐培养基，糖发酵管及苯丙酸培养基，进行生化反应试验。
同时利用纯培养物进行血清分型鉴定。
初步鉴定为椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌株，进行产毒培养和小鼠毒力试验，同时进行米酵菌酸的测定。
三、说明：
1．分离培养：
该菌在马铃薯－葡萄糖琼脂平板上菌落为1~2mm灰白色或乳黄色，光滑、湿润，边缘整齐，培养48h后，中心有凸起，呈草帽状，菌落周围产生黄绿色色素，扩散到基质中。
在卵黄琼脂平板上，菌落表面光滑，湿润，48h后，菌落周围形成乳白色混浊环，在斜射日光下，可见环的周围呈现虹彩现象。
该菌在SS琼脂平板上不生长。
2．O/F试验
将该菌培养在Hugh-leifson培养基，方法是挑取少量培养物做穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1％琼脂1~2mL于表面，放30℃培养。该菌为氧化型。封口培养不产酸，开口培养产酸。
3．本菌与假单胞菌的鉴别
椰毒假单胞菌酵米亚种与椰毒假单胞菌各种培养性状，生物第学性状基本一致，只在侧金盏花醇的利用上有区别。椰毒假单胞菌酵米亚种侧金盏花醇为阳性。
5．米酵菌酸的判定
从中毒样品中提取米酵菌酸，包括发酵食品或变质银耳，或分离出的椰毒假单胞菌酵米面亚种中提取的米酵菌酸，其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg（食品）才有意义。
