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鸡胰岛素样生长因子1(IGF-1)酶联免疫分析试剂盒说明

2019.12.04

使用目的:

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中胰岛素样生长因子 1(IGF-1)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡胰岛素样生长因子  1(IGF-1)胰岛素样生长因子 1(IGF-1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素样生长因子 1(IGF-1),再与  HRP 标记的胰岛素样生长因子 1(IGF-1)抗体。用纯化的鸡,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子1(IGF-1)呈正相关。用酶标仪在  450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡胰岛素样生长因子 1(IGF-1)浓度。

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过(HRP)活性。

操作步骤

  1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

操作程序总:

计算以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。



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