菌落PCR
实验方法原理 |
直接挑取菌落进行PCR,PCR的95℃加热可以破胞,释放基因组DNA或质粒,成为PCR体系的模板,然后进行链式扩增。 |
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实验材料 | 菌落样品 |
试剂、试剂盒 | dNTP PCR混合液 |
仪器、耗材 | PCR仪 |
实验步骤 |
1. PCR混合液的制备
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注意事项 |
1. 设计引物很关键。一般如果是定向克隆,用载体上的通用引物即可;如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆(如单酶切或平末端连接),一条引物用载体,一条引物用目的基因上的,这样就可以比较方便的鉴定了,而且错误概率很低。PCR条件的选择接近最佳,同时挑取的菌体不宜太多,否则会有非特异性扩增。
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综述
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焦点事件