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薄层色谱点样选购指南、操作技巧、注意事项(二)

2020.5.25

(二)带状点样

当样品溶液体积大、浓度稀时,采用CAMAG Linoamt Ⅳ型自动点样设备进行带状点样。定量分析的点样范围为1-99μl,制备型分离点样范围为5-490μl,作定量标准曲线时,可由同一标准溶液,自动点上不同体积的标准液,故快速简便,利用内装的微处理器编序操作,简单易行。使用时样品溶液吸在微量注射器中,点样器不接触薄层,而是用氮气将注射器针尖的溶液吹落在薄层上,薄层板在针头下定速移动点成0-199mm的窄带。带状点样展开后的斑点不仅分辨率明显高于点状点样,而且精密准确,为定量分析提供最佳条件。

(三)自动点样

Automatic TLC Sampler Ⅲ型(ATS Ⅲ)全自动点样装置结合了现代最先进的电子及机械技术,能进行点状或带状点样,采用先进计算机编程控制,灵活多用,点样量为10nl-50μl,可随意设定点样规范,可应用于单向、双向、环形或向心色谱展开,高度自动化的点样使定量分析结果准确。点样参数可与Scanner Ⅱ扫描仪的CATS扫描分析软件连用,令定量分析工作达到高度自动化。

(四)接触点样

当样品溶液粘度较大或点样体积要超过100μl时,用毛细管点样就有困难,Fenimore设计的接触点样法适用于这类样品的点样,美国制造的Clarke Contact Spotter就是这种接触点样器,见图7-3-2。在带有抽气孔的凹形块的上方覆盖一片涂有疏水性物质的聚氟化物薄膜(a),当减压抽气时薄膜凹陷(b),此时将样品溶液点在凹槽处(c),然后用氮气吹去大部分溶剂(d),再将浓缩后的样品液滴与高效薄层板的吸附剂层接触(e),此时样品就定量地转移到薄层上。

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1988年Kaiser对以上各种点样方式进行了比较,总结其优缺点见表7-3-1、图7-3-3。

表7-3-1 各种点样方式的比较 

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图7-3-3中A-F为最常用的毛细管或注射器点样:A—一次性数毫米长的薄壁玻管;B—长5-60mm,内径为0.2-0.05mm的熔融石英管,用机械手操作;C—封在玻璃管中的铂铱合金管(100nl,200nl),可精确点样,生物样品点样后可用火焰清洁,见图7-3-4;E—微量注射器,机械控制,接触板面点样;F—同E,用步进马达控制操作;G—同E,样品溶液用气体喷到薄层板上;H—同E,完全用计算机控制点样;I、K、L—借泵系统点样,用于高压平面液体色谱(HPPLC);M—为Fenimore的固态样品环形转移器。

用管状点样器上样的误差来源是由于点样时薄层表面的损伤,溶液“爬壁”效应使外壁样品的沉积、样品的记忆效应以及管中的微小气泡等,见图7-3-5。
点样误差的大小与样品的溶解度,溶液的表面张力,溶剂的粘度、挥发性和极性、点样所耗费的时间、薄层板的质量(粒度、均匀度、薄层厚度、粘合剂的性质)等有关。


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