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C280成像系统在考马斯蓝和银染蛋白胶成像中的应用

2020.8.17

  Azure Biosystems c系列数字成像系列产品是行业领先产品,用户界面友好、应用灵活。 在本应用中,我们展示了一些可以在c系列家族最新成员Azure Biosystems c280上完成的新应用。

  简介

  Azure Biosystems c280数字成像仪是数字化学发光成像的理想切入点。 然而,其优点并不止于此,具有双波长302nm和365nm紫外的c280用于溴化乙锭(EtBr)DNA凝胶的成像;使用EPI蓝光LED 用于“安全”DNA染料SYBR Green等的成像;RGB混合白光光源用于考马斯蓝,银染蛋白胶等的成像。

  C280的用户界面友好,自动聚焦,软件控制光源和滤光片选择使成像变得更容易。

  材料和方法

  DNA凝胶

  通过凝胶电泳分离进行系列稀释的东升生物技术公司100bp Ladder Plus。使用预先EtBr染色的凝胶或用SYBR Green后染色的凝胶,使用紫外透射仪(302nm)或EPI蓝光在Azure Biosystems c280数字成像仪上采集图像。

  考马斯亮蓝染色的凝胶

  一系列纯化的转铁蛋白进行稀释,使用4-15%的Tris-Glycine凝胶进行稀释,考马斯亮蓝染料进行染色,使用AzureC280 RGB混合光源进行成像采集成像。

  化学发光+可见彩色Marker成像

  纯化的转铁蛋白经过一系列的稀释从500pg-61fg,使用SDS-PAGE电泳进行分离,蛋白分离后使用Azure转印buffer转印到低荧光背景膜上,进行封闭,孵育 chicken-anti-transferrin 的一抗,漂洗,孵育goat-anti-chicken HRP 的二抗;所有的稀释液使用Azure Chemi Blot Blocking

  Buffer.使用Azure Radiance chemiluminescent 底物液,成像使用C280化学发光模块进行采集并与彩色marker进行整合。

  结果和讨论

  在这个应用中,Azure Biosystems c280数字成像仪应用更灵活。 DNA凝胶结果显示在图1中 -A)EB使用紫外302nm成像,B)SYBR Green染色的类似凝胶用Epi Blue成像。

  图1.DNA凝胶使用EB和SYBR染料进行染色A)EB染色的凝胶使用UV302nm进行成像 B)SYBR Green染色的DNA凝胶,使用RGB混合白光光源进行成像,图中方框展示的是78pg的浓度

  图2显示了代表性考马斯蓝染色的蛋白质凝胶。 Azure Biosystems c280数字成像仪具有高分辨率CCD,自动图像采集协议。 可见成像模式直接获取彩色图像,对比更明显。

  图2:考马斯亮蓝染色的凝胶,纯化的转铁蛋白经过一系列的稀释从5000ng-5ng,使用4-15%的Tris-Gly凝胶进行分离,使用考马斯亮蓝染液进行染色,方框展示的是10ng的蛋白。

  最后,图3显示了数字化学发光图像与可见光彩色marker整合图,允许精确的分子量分析。

  图3.化学发光-可见光整合成像,纯化的转铁蛋白经过500pg-61pg一系列稀释,使用化学发光 western blot进行检测,C280化学发光和可见彩色Marker同时成像进行整合。

  言之,Azure Biosystems公司的c280是多功能多应用成像仪,可以简化大量常用的实验室技术。 以其经济的价格,和易用性,C280化学发光成像系统是您实验室理想选择。


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