原代肿瘤细胞的选择性培养：汇合饲养层肿瘤细胞筛选...

原代肿瘤细胞的选择性培养：汇合饲养层肿瘤细胞筛选实验

饲养层技术取决于通过其他接触抑制细胞形成的单层预防成纤维细胞的过度生长。 饲养层技术并不能选择性抑制正常上皮细胞， W为正常表皮细胞和正常乳腺上皮都能在 汇合的伺养层上形成克隆。然而，神经胶质瘤研究的结果表明，在同种饲养层上选择培养等同的正常细胞是可能的。

方案 24.1 汇合饲养层肿瘤细胞筛选实验

实验方法原理

在指数生长中期，用丝裂霉素C处理饲养层细胞，将细胞培养形成汇合的单层。通过胶原蛋白酶消化从活检标本分离肿瘤细胞，或者用胰蛋白酶消化从原代培养物获得肿瘤细胞，然后将肿瘤细胞接种到汇合的单层上（图24.1）。上皮性肿瘤细胞可以在3周至3个月内形成克隆。纤维肉瘤和神经胶质瘤并不总是形成克隆，而可侵入饲养层，并逐渐过渡生长。

实验材料 3T3细胞STO细胞10T1 2 细胞

试剂、试剂盒 生长培养液胶原蛋白酶胰蛋白酶

仪器、耗材 手术刀 Petri 培养皿

实验步骤

一、材料

无菌 

1. 饲养层细胞（如 3T3、STO、10T1/2 或 FHS74Int）

2. 1 mg/ml 丝裂霉素 C（Sigma）

注意：

首次使用饲养层细胞时，最好作丝裂霉素 C 的剂量反应曲线，证实这个剂量能使饲养层细胞存活 2~3 周，但使细胞最多进行两个倍增后不再继续增殖。在这种情况下，按如下步骤进行：

（1）将 25 cm2 培养瓶中的细胞用 1~100 μg/ml 丝裂霉素 C 处理过夜（18 h）