分析氨基甲酸酯农药的实验方法

　　色谱流动相的制备： 1 M甲酸铵溶液：溶解 63 g甲酸铵于1 L HPLC级的水中。 流动相A：在1 L HPLC级的水中，加入5 mL 1 M甲酸铵溶液。 流动相B：在1 L HPLC级的甲醇中，加入5 mL 1 M甲酸铵溶液。

　　样品制备(蔬菜与水果基质) 基于Anastassiadies等人提出的方法[1]： 1. 称量10 g 混合样品； 2. 加入100 µL 内标溶液 (D5-Atrazine，1 µg/mL)； 3. 加入10 mL乙腈，剧烈振摇； 4. 加入4 g无水MgSO4和1 g NaCl； 5. 马上涡旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成； 6. 振摇30 s后，4300 r/min离心5 min； 7. 转移初提液1 mL至含有150 mg无水MgSO4的离心管中； 8. 混合，5200 r/min 离心1 min； 9. 转移上清液500 µL，用水稀释到1 mL，得到提取液浓度为0.5 g/mL

　　基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3]： 1. 在5 g或10 g样品中，加入水到10 mL； 2. 加20 mL甲醇，使用UltraTurrax 组织匀浆机匀浆2 min； 3. 有时需要过滤，或离心； 4. 加入NaCl 溶液 (100 mL水中含20 g NaCl)，每6 mL加入NaCl溶液2 mL； 5. 用5 mL样品溶液浸泡 ChemElut 柱； 6. 5 min后，用16 mL二氯甲烷洗脱； 7. 40 ℃挥发至干； 8. 用甲醇与水的混合溶液1.25 mL（甲醇0.25 mL，水1 mL）重新溶解； 9. 用0.45 µm滤膜过滤。

　　基于Lehotay et al.[4]提出的方法： 1. 使用Molinex 混合器或类似设备匀质水果或蔬菜样品； 2. 加入乙腈，( 15.0 ± 0.05 ) g匀质的样品加乙腈15 mL，超声提取2 min后，混旋5 min；分析氨基甲酸酯农药的实验方法• 60 • 3. 加入6 g无水MgSO4和1.5 g NaCl的混合物，剧烈振摇1 min； 4. 3000 r/min 离心5 min； 5. 取5 mL上层溶液，加入1.8 g无水MgSO4和0.3 g Bondesil C8 吸附剂； 6. 振摇20 s； 7. 使用Eppendorf 5301型浓缩仪，或类似设备挥发至干； 8. 用乙腈 / 水＝1 / 9的溶液1 mL重新溶解样品； 9. 12000 r/min 高速离心 2 min； 10. 上清液转入自动进样器的进样瓶中备用。

　　样品制备(动物组织)[5] 1．称取10 g试样（猪肉、牛肉、羊肉、兔肉、鸡肉）(精确至0.01 g)，放入盛有20 g无水硫酸钠的50 mL 离心管中，加入35 mL环己烷 + 乙酸乙醋混合溶剂，用均质器在15000 r/min均质提取1.5 min，把离心管放 在离心机中，在3000 r/min离心3 min。上清液通过装有无水硫酸钠的筒形漏斗，收集于100 mL鸡心瓶中， 离心管中的动物组织残渣再用35 mL环己烷 + 乙酸乙醋混合溶剂提取一次，离心后上清液转移到筒形漏斗 中，合并提取液，将提取液于40 ℃水浴用旋转蒸发器旋转蒸发至约5 mL，待净化。若以脂肪计，将提取 液收集于已称量的鸡心瓶中，用旋转蒸发器在40 ℃水浴蒸发至5 mL，然后再用氮气吹干仪吹干残存的溶 剂，鸡心瓶称量后，待净化。 2．将浓缩的提取液或脂肪用乙酸乙醋 + 环己烷混合溶剂 (1+1) 溶解转移至10 mL容量瓶中，用5 mL 环己烷 + 乙酸乙酷混合溶剂分两次洗涤鸡心瓶，并转移至上述10 mL容量瓶中，再用环己烷 + 乙酸乙酷混 合溶剂定容至刻度，摇匀将样液过滤入10 mL试管中，供凝胶渗透色谱仪净化，收集22～40 min的馏分于 100 mL鸡心瓶中，并在40 ℃水浴旋转蒸发至0.5 mL。用氮气吹干，再用1.0 mL乙睛 + 水 (60+40) 溶解残渣， 供液相色谱一串联质谱进行检测。

　　色谱分离条件 Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。 色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50 mm×2 mm，4 µm，80 Å。 流动相：A相—水 + 5 mM 甲酸铵；B相—甲醇 + 5mM 甲酸铵。

　　MS/MS 检测 API 3200™、3200 QTRAP® LC-MS/MS液质联用系统。TurboIonSpray® 离子源，正离子模式，MRM扫描方式。