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原位PCR与PCR的区别

2021.5.12

  PCR是提取细胞或组织中的DNA进行基因扩增反应,而原位PCR是保持细胞或组织的完整性,使PCR反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增,不但可以检测到靶DNA,而且还可以了解靶DNA存在于何种细胞中,更有利于探讨靶DNA与细胞之间的关系。

  PCR所采用的反应体系能否应用于原位PCR

  PCR与原位PCR所采用的反应体系中都包括Taq聚合酶缓冲液、Mg2+、K+、4×dNTP、一对特异性引物和Taq聚合酶。但是由于组织细胞间质会吸附Mg2+,所以原位PCR中采用的Mg2+浓度要比PCR的要高,采用4.5-5.5mM可以保证有足够的Mg2+进行反应。另外由于原位PCR中的基因扩增过程中,各反应成分须经过渗透到靶DNA处才能进行扩增,所以建议将反应循环数增加到35 个。

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