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普通培养箱改为CO2培养箱及在杂交瘤中的应用

2021.11.03

 将三角形橡胶密封条和医用乳胶管用市售强力胶封闭内箱接缝处及玻璃内门:除去箱顶温度计,箱内挂入干湿温度计(可在玻璃内门处观察温、湿度):原温度计孔以橡胶塞密封后打孔安装二氧化碳培养箱入气管和排气管,连接CO2钢瓶与CO2入气管,排气管用铁夹夹闭;
       普通氧气流量表控制CO2流量,湿化瓶内盛10硫酸铜水溶液(可抑制霉菌生长);内箱底层置一方盘盛水(可保持箱内相对湿度在70以上)。测量内箱长、宽、高,计算容积为600m3,开放排气管,调节CO2流量在10升:分,持续3分钟,进气30升。此时箱内CO2理论含量应为50,夹闭排气管。
       我们用CO2检测管测得CO2实际含量为5±0.20.24小时后CO2含量下降约0.50,左右,可用CO2持续微量补充(以20个气泡分计)来衡定控制温度在370.5℃
       使用注意       1.环境尽量保持清洁二氧化碳培养箱定期熏蒸消毒,及时更换湿化瓶内的硫酸铜溶液,以防止霉菌生长和支原体污染。
       2.平时短、频繁地开启可不必补充CO2,使用完毕后按要求及时重新调整CO2含量。
       3.由于该二氧化碳培养箱外门无电热装置,导致玻璃门内外温差而出现的冷凝水,一般无不良影响。有条件者可在外门夹层加电热丝解决。
       4.因箱内无气体循环系统,CO2与空气混匀度未必一致,但实验结果证明并无影响。
讨论我们应用该二氧化碳培养箱进行载脂蛋白B100单克隆抗体(apo100cab)杂交瘤细胞系的建株实验,获得成功。培养的小鼠SP20-Ag14骨髓瘤细胞系及小鼠脾细胞、腹腔巨噬细胞、杂交瘤细胞等均生长良好,平均融合率为666克隆化培养后所获的3株apoB0 ) McAb杂交瘤细胞系诱生的腹水中McAb效价均为1:3200( ELISA):细胞株经液氮保存、传代与冻融一年多,仍能持续稳定地分泌高滴度的McAb实践证明,这一装置性能稳定,使用方便,经济可靠,并可根据需要调整CO依度,可完全替代昂贵的自动CO2孵箱,对普通实验室及基层单位进行细胞培养和制备单充隆抗体具有广泛的推广价值。

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