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奥林巴斯生物显微镜使用贴士——覆盖差

2020.6.15

奥林巴斯生物显微镜的光学系统也包括盖玻片在内。由于盖玻片的厚度不标准,光线从盖玻片进入家空气产生折射后的光路发生了改变,从而产生了象差,这就是覆盖差。覆盖差的产生影响了显微镜的成象质量。

国际上规定,奥林巴斯生物显微镜中盖玻片的标准厚度为0.17mm,允许范围在0.16~0.18mm,在物镜的制造上己将此厚度范围的象差计算在内。物镜外壳上标刻的0.17,即是表明该物镜要求盖玻片厚度。

由于制作技术等原因,奥林巴斯生物显微镜中盖玻片厚度可能在0.16以下或0.18以上,因而就会带来覆盖差。盖玻片太厚,不该进入物镜的光线会进入物镜;盖玻片太薄,则应该进入物镜的光线却不能进入。

奥林巴斯生物显微镜中放大倍率愈高,NA值愈大,覆盖差愈明显,尤以盖玻片厚,覆盖差更为严重。

在奥林巴斯生物显微镜中消除覆盖差最理想的办法,是用带校正环的物镜来调节。这种物镜常为40times干燥系物镜。老式显微镜可以用改变镜筒长度来调节,盖玻片过厚,可以将镜筒缩短;过薄,可将镜筒相应拉长。但这是消极的方法,因镜筒长度改变,放大率也随之改变,同时也影响成象质量。因此不适用研究用显微镜。

油浸系物镜不存在覆盖差问题,这是由于油和盖玻片的折射率都在1.52左右,因而形成均匀的光学系统。但是使用油镜时,奥林巴斯生物显微镜中盖玻片太厚,超过了工作距离,则无法调焦,甚至看不到图象。

有的物境上标有"-"符号,一般为低倍物镜(0.5times、0.75times、1times、2times),其NA值很低,不受盖玻片的影响,这种物镜可加也可不加盖玻片;有的物镜上标有"0”符号,为不能加盖玻片的物镜,叫“无罩物镜”。

在奥林巴斯生物显微镜中物镜数值孔径越大,允许盖玻片厚度误差的范围愈小,也说明越是高倍物镜对盖玻片厚度的要求越严格。


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