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血清葡萄糖测定实验

2020.8.10

实验方法原理	葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖醛酸，并产生过氧化氢：葡萄糖十2H2O＋O2＝葡萄糖酸十2H2O2。在色原性氧受体（如联大菌香胺，4氨基安替比林偶联酚）的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化色素原，生成有色化合物。
实验步骤	一、实验试剂： l、lmol／L磷酸盐缓冲液（PH7.0）：溶解无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g于800ml蒸馏水中，用lmoL/L氢氧化钠或盐酸调节PH值至70，然后用蒸馏水稀释至1L． 2、酶试剂：取葡萄糖氧化酶1200W 过氧化物酶1200w，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠10Omg，加上磷酸盐缓冲液至80ml左右，调节pH7.0加磷酸盐缓冲液到100ml，置冰箱保存，至少可稳定三个月。 3、酚溶液：重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中，贮存棕色瓶中． 4、酶酚混合试剂；酶试剂和酚溶液等量混合，在冰箱内可以存放一个月． 5、葡萄糖标准应用液（5.6mmol/L）二、操作：取数支16mmm×100mm试管，按下表进行操作。混匀，置37℃水浴中，保温15min，用分光光度计，波长505nm，比色杯光径1.0cm，以空白管调零，分别读取标准管及测定管吸光度。三、计算：血清葡萄糖mmol/L＝测定管吸光度/标准管吸光度参考值：空腹血清葡萄糖为3.89－6.11mmol／L
注意事项	1、新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故需放置2h以上（最好过夜），待等适衡后方可应用． 2、葡萄糖氧化酶催化反应的最适PH范围（6.5－8.0），但当PH低至6.6时，反应终点的吸光度略有下降，选用PH7.0土0.1． 3、由于温度对本法影响较大，故试剂从冰箱取出达到室温时，再进行测定． 4、测定样本以草酸钾－氟化钠为抗凝剂的血浆为好。