α-淀粉酶的测定
实验方法原理 将淀粉切割成小片段和麦芽糖。不同来源的 α-淀粉酶的最适 pH 不同。从 Bacillus subtilis 中提取的细菌酶在 pH 5.5 时有其最高活性,并且必须采用适合的缓冲溶液。
实验材料 4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶
试剂、试剂盒 磷酸钾麦芽糖溶液淀粉溶液二硝基水杨酸试剂
仪器、耗材 分光光度计
实验步骤
实验所需「试剂」具体见「其他」
0.05 ml 淀粉溶液
0.05 ml 酶样品(稀释于 0.1 mol/L 磷酸钾,pH7.0)。
25 ℃ 培养 5 min
0.1 ml 二硝基水杨酸试剂
在 100 ℃ 混合 10 min
1 ml H2O
测 546nm 处吸收值值。
借助校准曲线测出酶的活性。浓度范围在 4~30 ul 的麦芽糖溶液,用水补充到 0.1 ml,而后向每个样品中添加 0.1 ml 二硝基水杨酸试剂。100℃ 孵育 10 min 后,加入 1 ml 水,并测 546 nm 处吸收值。
计算。
1 个单位被定义为:25℃、pH 7.0 时,每分钟从可溶淀粉中释放 1 mol 还原基团的酶量。
注意事项
其他
试剂:
0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.0
10 mmol/L 麦芽糖溶液(一水合物,Mr=360.3;36 mg 麦芽糖溶于 10 ml 水中)
淀粉溶液(0.5 g 可溶淀粉,17.5 mg NaCl,溶解于 50 ml 0.1 mol/L 磷酸钾溶液 pH 7.0,煮沸溶解)
二硝基水杨酸试剂(3,5-二硝基水杨酸,2-羟基-3,5 二硝基苯甲酸,Mr=228.1;溶解 1 g 于 20 ml 2 mol/L NaOH 和 50 ml 水,溶解 30 g K-Na-酒石酸并用水补充至 100 ml)。