培养基的配制及高压蒸汽灭菌-2
4.过滤
趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察.一般无特殊要求情况下，这一步是可以省去的；
5.分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或者三角烧瓶内:
(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜。
（2）固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制斜面。分装三角瓶的量以三角瓶容积的一半为宜。
（3）半固体试管一般以试管高度的1/3左右为宜，灭菌后垂直待凝。
6. 加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能；
7.包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称 ，组别，配制日期.三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用容易解开，同样用记号笔注明培养基名称，组别，配制日期；
8.灭菌
将将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜，放回内层锅，并装入培养基，加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，加热，0.103MPa，121°C并同时打开排气，使水沸腾以排除锅内的冷空气，待冷空气完全排尽后，关上排气，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升；当锅内压力升到所需压力时，维持压力至所需时间。20min后，切断电源或者关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至”0”时，打开排气，旋送螺铨，打开盖子，取出。将取出的灭菌培养基放入37°C温箱培养。24h，经过检查，若无菌生长，既可待用；
9.搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷至50°C左右，将试管口端搁置在玻棒或其它合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜；
高压蒸汽灭菌
一、目的要求
1.了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
2.学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、基本原理
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃
的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表Ⅵ-2），二是湿热的穿透力比干热大（表Ⅵ-3）；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃ 时，由气态变为液态时可放出2.26kJ（千焦）的热量。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
