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扫描电镜样品的处理过程介绍

2021.5.17

扫描电镜(SEM)是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观形貌观察手段,可直接利用样品表面材料的物质性能进行微观成像。扫描电镜的结构包括电子光学系统、图像显示和记录系统、真空系统、X射线能谱分析系统。其基本原理是用极细的电子束在样品表面上扫描,然后按电视原理放大成像,显示在电视屏幕上。

 

扫描电镜样品的处理过程:

 

主要包括表面清洁、固定、漂洗和脱水等过程,基本上与透射电镜样品的处理方法相似,但也有其特殊之处。

 

1. 样品大小 所切取样品比透射电镜样品稍大一些,为8~10mm2,高约5mm。

 

2. 清洁表面 清洁表面并充分暴露样品表面。常用清洗液有蒸馏水、生理盐水、缓冲液及含酶的清洗液等。

 

3. 固定和脱水 常用的固定方法是戊二醛-四氧化饿双重固定,也可用戊二醛单固定法。

 

常用脱水剂是乙醇或丙酮。脱水剂浓度梯度增加,从30%或50%开始至100%进行脱水;易变形样品脱水剂浓度梯度宜缓慢递增。

 

4. 样品的干燥 脱水后,需要将样品中的脱水剂彻底挥发干净,即样品干燥。其方法有:空气干燥 、真空干燥、冷冻干燥和临界点干燥。

 

5. 样品表面导电处理 用金属镀膜法和组织导电处理技术,一是可增强导电能力,消除荷电效应;二是增加样品表面二次电子发射率,加强讯号,提高图像反差。

 

(1)金属镀膜:使样品表面覆盖薄层金属膜,这层薄膜与样品表面的凹凸形态完全一致,使标本表面的形貌得以反映。常用的金属有金、铂、钼、或金/铂、铂/铯合金。镀膜的方法有真空镀膜法和离子溅射法。

 

(2)组织导电技术:其目的是为提高导电率克服生物材料的荷电效应,提高样品表面二次电子发射率。组织导电处理也称导电染色,是利用某些金属盐类能与生物材料中的蛋白质、脂类和淀粉等结合,使样品表面离子化,使组织导电性增加;并且提高二次电子的发射率。可用醋酸铀、碘化钾、丹宁酸等处理标本。




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