微生物检验培养基、试剂、染色液和血清的质量控制

一、配制时的质量控制

（1）容器：配制和分装培养基的烧瓶、平皿或试管等器材应为中性，无酸、碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏试验结果。

（2）成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。特殊要求的培养基，如葡萄糖氧化发酵试验（O／F 试验），除加入葡萄糖外，不能含有其他糖类，指示剂不能用乙醇溶液，避免O／F试验的假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。

（3）pH值调整：根据培养基的不同要求调整pH 值，控制在要求范围的±0.2之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矫正时应比实际需要p H值高0.1～0.2。

（4）灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌效果，又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基，如MH琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即121℃15min ；而含糖的培养基则以108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。

（5）分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平皿、试管要求清洁，不残留酸碱；制备平板培养基时，操作台要水平，以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。

二、配制后质量控制

（1）培养基外观情况：包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离，说明培养基有脱水现象，必须丢弃。

（2）无菌试验：每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌后分装的培养基，可采用抽样方法试验，少于100个样本通常选取5％～10％的量，如果配制大量培养基，则任意选取10 个培养基；无菌分装培养基则需全部做无菌试验。样本在35 ℃ 或其他适宜的温度下隔夜培养，如培养基含有，则需再置于室温1天，以检查嗜冷菌。选择性培养基因含有抑制物质，能抑制许多，因此，可加入10倍量的无菌液体培养基，稀释抑制物质，以利于检出污染菌。即使做过无菌试验，接种时，也要检查每个平板上的可见菌落。

（3）性能测试：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的库存菌种进行性能测试。培养基按目的不同可分为增菌培养基、分离培养基和鉴定培养基。

①增菌培养基：接种少量难以生长的，在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的最小接种浓度越小，说明增菌培养基性能愈好。 

②分离培养基：要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌接种量不可过多，较好的方法是将测试菌调成0．5麦氏浊度的菌悬液，再用0.001ml的标准接种环涂划在培养基上，观察菌落生长。

③鉴定培养基：应选择具有典型特征的菌株作性能试验。如三糖铁琼脂，须用弗劳地枸橼酸杆菌、福氏志贺菌及铜绿假单胞菌3种菌分别接种3支培养基，若反应结果为斜面产酸／高层产酸、硫化氢阳性，斜面产碱／高层产酸，斜面产碱／高层产碱，质量才算合格。 

试剂、染色液和血清质量控制

一、试剂

各种试剂配好后，均应注明试剂名称、配制日期、有效期及配制者，并作记录，商品试剂亦应注明购入日期及有效期。配制好的试剂均应用标准菌株作性能测试，不合格者不能使用。性能测试间隔可根据试剂的稳定性和使用频率而定，如氧化酶试剂每天用前测试，靛基质试剂每周测试1 次。试剂须根据不同要求作适当的贮存，如氧化酶试剂应置棕色瓶中4 ℃冰箱保存。

二、染色液

常用染色液如革兰染色液在每次配制后并常规至少每周检测1次，用标准菌株金黄色葡萄球菌（ATCC25923）和大肠埃希菌（ATCC 25922）作阳性和阴性检测。不常用染色液（如鞭毛染色液）应于每次使用前，用已知特征的菌株作检测。

三.诊断血清

诊断血清的使用和保存必须按说明要求执行，一般置4℃冰箱贮存，且不得暴露室温过久；使用前应注意有效期及效价，第一次使用抗血清时应用相应的菌株检查其有效性，以后每月检测1次。如抗血清出现任何颜色的改变或混浊，即不能使用。