液相色谱柱使用的3个注意事项
1 色谱柱的安装
色谱柱在使用过程中避免强烈的碰撞和震动。各个厂家生产的色谱柱在接口尺寸上有差异,如果柱头类型和不锈钢毛细管接头两者类型不匹配,将会产生漏液或者死体积过大的现象。接头比柱头深度长,不易拧紧而漏液;接头比柱头深度短,柱头内留有空隙而产生死体积,使谱带展宽和峰拖尾。
2 色谱柱的平衡
色谱柱平衡指的是用完整的分析程序,运行几遍测试,等观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止,平衡即完成。另外,在使用缓冲盐时,应该先使用水过渡后,再将缓冲盐引入色谱柱,以防止盐析发生,从而损坏色谱柱。
3 色谱柱的保存
最好遵守色谱柱说明书中的保持方式。在实际应用中为了方便也可以如下使用:短期保持用所用的流动相保存为佳,这样做可以减少下次使用的平衡时间。一般情况下,建议长期用80%甲醇或乙腈来保存反相柱。纯有机相保持有最大限度减少键合相水解的作用,但纯甲醇(乙腈)又会将已水解而暂时吸附在柱内的键合相洗脱出去,使固定相流失进程加快,缩短寿命;另外,纯有机相保存时,溶剂易挥发,导致柱床变干,也会容易损坏色谱柱。正相柱一般应保持在所用流动相中。
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