分离获得ASC后,可以通过连续传代使其生长和扩增。原代培养后,传代2〜3次,ASCs呈现单层,大而扁的细胞形态,其直径在25〜30μm。待细胞达到汇合时,它们形态上呈纺锤体形,类似于成纤维细胞。来源:《人干细胞培养》
实验材料 | 脂肪干细胞 |
---|
试剂、试剂盒 | ASC培养基PBSA胰蛋白酶 |
---|
仪器、耗材 | 组织培养瓶 25cm2(T-25)细胞刮 |
---|
实验步骤 | (a)细胞达到80%汇合时即可传代。
(b)弃去培养基,加人PBSA洗涤贴壁细胞。
(c)加入足量胰蛋白酶,使之覆盖细胞,将培养瓶中,置于37℃,5% CO2温箱中。
(d)细胞与胰蛋白酶共孵育3 min后,用细胞刮将细胞刮下。
(e)加人ASC培养基使胰蛋白酶失活。
(f)按照1:2比例,将细胞接种至2个T-25培养瓶中。 展 |
---|