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毛细管等电聚焦电泳色谱仪分离蛋白质的原理

2019.12.20

蛋白质是一种两性电解质分子,当它在大于其等电点的pH环境中时,会解离成带负电的离子,在电场中向正极泳动;当它在小于其等电点的pH环境中时,会解离成带正电荷的离子,在电场中向负极泳动。这种泳动作用到达它的等电点的pH环境中,即它的净电荷为零时才会停止,此时蛋白质在电场作用下的迁移运动与扩散运动达到平衡。如果在毛细管等电聚焦电泳色谱仪的pH梯度环境中进行蛋白质的电泳,由于各种蛋白质的等电点不同,就能把不同蛋白质分子按等电点集中和分离在不同的区带中。

在毛细管等电聚焦电泳色谱仪的蛋白质等电聚焦过程中,分离仅仅决定于蛋白质的等电点,这是一个稳定过程,一旦蛋白质到达它的等电点位置,失去净电荷,就不能进一步迁移而停留在与此蛋白质pI相同的pH值位置。等电聚焦的zui大优点是具有浓缩效应(聚焦效应),可对抗扩散,产生窄而稳定的蛋白质区带。在毛细管等电聚焦电泳色谱仪中,电极之间的pH梯度是线性和连续的,蛋白质即使会扩散,如果蛋白质区带向阴极扩散,则进入高pH范围而带负电荷,阳极会将它吸回去,直到它回到净电荷为零的位置。如果蛋白质区带向阳极扩散,则进入低pH范围而带正电荷,阴极会将它吸回到净电荷为零的位置。因此,蛋白质只能在它的等电点位置被聚焦成一条窄而稳定的区带。

   

 


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