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C18色谱柱的使用及维护

2020.1.22

组成成分:

液相色谱柱依据记性分为正相柱和反相柱。 

正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-cn,-nh3等官能团的键合相硅胶柱;

反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18柱,其常用的反相柱还C8,C4,C2和苯基柱等。 

C18色谱柱的运用和维护:

PH适用范围

反相柱长处是固定相稳定,应用广泛,可以运用多种溶剂。可是硅胶为基质的填料,运用时,会导致检核相的水解;

当PH值大于7时硅胶易溶解;

经常运用缓冲液固定想要降解。PH过高或过低还可能 会危害密封圈和柱塞杆以及色谱柱更严峻的是当PH大于9.5时会损坏流通池的石英玻璃如果发现上述情况,色谱柱进口会发生塌陷。 样品的前处理 好运用活动相溶解样品 运用枕头过滤器(0.5um滤膜)出去样品的可见异物 活动相装备 活动相对样品具有一定的溶解能力,而且保存样品不会再色谱柱内或长时间留在色谱柱内 活动相年度尽量小,使样品得到高效别离的一起下降柱压,延伸色谱柱寿命 活动相沸点不能太低,防止有气泡发生,影响实验进行 活动相要确保现配现用,不能储存太久,防止活动相生成杂志微生物影响检测 活动相运用前先脱气

注意事项

新色谱柱运用: 先用10~20倍柱体积的色谱级甲醇和乙腈由低流速缓慢进步至正常流速冲刷,随后换至10%甲醇低流速缓慢进步至正常流速冲刷 分清色谱柱方向 尽量在色谱柱前段加维护柱,并定时清洗维护柱 色谱柱冲刷 运用结束先用10%甲醇/水冲刷,如果长时间不必再用纯甲醇冲刷、维护(一般情况下,10%甲醇/水低流速冲刷过夜)

色谱柱再生

用相当于20倍体积的溶剂按顺序冲刷柱子,尽可能依照色谱柱方向冲刷,尽量不反冲 + 10%甲醇/水溶液、甲醇、氯仿(或异丙醇) 甲醇或用热蒸馏水(55℃)+四次注射100u1DMSO


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