怎样设定原位PCR对照实验
设立阳性对照，即用已知阳性细胞或组织切片做阳性标志，实验结果应呈阳性，表明实验方法准确可靠。同时要设立阴性对照，即用已知阴性细胞或组织切片作阴性对照，实验结果应呈阴性，表示实验方法无假阳性结果；也可以用实验细胞或组织切片，不加标记的dUTP（直接法），PCR结果显示阴性，或不加引物或不加TaqDNA聚合酶等，结果均应阴性。
原位PCR中直接法和间接法有何异同
直接法：进行原位PCR扩增以前，把同位素或非同位素(常用)标记的核苷(如dig-dUTP及Biotin-dUTP)标记的底物或引物5’末端连接标记物加入PCR反应液中，随着扩增的进行，标记的核苷或引物直接掺入到PCR产物中，然后免疫组化直接进行检测。间接法：先进行细胞内目的DNA基因原位扩增，然后用标记的探针进行核酸分子原位杂交以定位检测扩增的DNA的技术，步骤相对较多，需时长，但结果可靠。
获得特异原位PCR结果需要考虑哪些关键因素
原位PCR技术操作包括了组织学技术、PCR技术、原位杂交技术及免疫组化学技术，因此在复杂的操作过程中，有很多因素影响实验结果。要考虑的一些关键因素有待检组织的有效固定，在PCR前的组织预处理包括酶消化使核酸有效暴露，PCR环节中要设计特异的扩增引物、Mg2+的浓度、TaqDNA聚合酶用量、反应循环参数。间接法中用原位杂交检测时考虑探针浓度、抗体浓度和显色时间。
原位PCR中的组织预处理和原位杂交是否相同
要获得理想的原位PCR结果，需要将待检组织进行预处理使核酸充分暴露，这和原位杂交组织预处理的原则相同。因此原位杂交中的组织预处理步骤如HCL和蛋白酶处理等同样适用于原位PCR。
推荐
