乌司他丁溶液的效价测定方法

效价照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定。胰蛋白酶溶液临用新制,并置冰浴保存。

精密称取结晶蛋白酶(每1mg含7500~10000BAEE单位)适量,用冷的氯化钙盐酸溶液(取氯化钙2.94g,加0.001mol/L盐酸溶液o00ml溶解)溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液底物溶液临用新制,并置暗处保存。取苯甲酰-精氨酸--对硝基苯胺盐酸盐适量,加水溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液。0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(pH7.8)取三乙醇胺29.8g,加水900ml溶解,用4mol/L盐酸溶液调节pH值至7.8,加水至1000ml供试品溶液精密量取本品适量,用0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(pH7.8)定量稀释制成每1ml中约含50单位的溶液。标准品溶液取乌司他丁标准品,加0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(pH7.8)溶解并定量稀释制成每1ml中约含50单位的溶液。

测定法取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(pH7.8)(预热至25℃±1℃)1.6ml,置比色池中,加标准品溶液与胰蛋白酶溶液各0.2ml,混匀,准确保温5分钟,使比色池内温度保持在25℃士1℃,加底物溶液(预热至25℃±1℃)1.0ml,立即摇匀并计时,以水为空白,在405nm的波长处,每隔1分钟测定吸光度,共5分钟,吸光度的变化率应恒定。以反应时间为横坐标,吸光度为纵坐标作图,求出每1分钟的吸光度变化率(△A,。分别取0.2mol/L三乙醇胺缓冲液(pH7.8)与供试品溶液各0.2ml,代替标准品溶液同法操作,求出吸光度变化率△A和△A2,按下式计算每1ml乌司他丁的效价(单位)△A。-△A:×UX式中△A。

为三乙醇胺缓冲液吸光度的变化率;△A1为供试品溶液吸光度的变化率;△A为标准品溶液吸光度的变化率;U为每1ml标准品溶液中含乌司他丁单位数;V为供试品取样量,ml;n为供试品的稀释倍数测得的效价应为估计效价的90%~110%,否则应调整供试品溶液的浓度重新测定。蛋白质含量精密量取本品适量,照蛋白质含量测定法(通则0731第一法)测定每1ml中蛋白质含量,即得。比活由测得的效价和蛋白质含量计算每1mg蛋白中含乌司他丁活力的单位数