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如何选择合适的多功能酶标仪产品

2018.8.03

  这些年,跟着多功用酶标仪在国内各高校试验室逐步推广开来,多功用酶标仪品牌和类型也逐步多了起来,乱用渐欲迷人眼。除了三大传统优势品牌PE、MD和TECAN,还呈现了许多后来者插足此商场,如收买了芬兰雷勃的Thermo、从发光发家的Berthold、对于药筛范畴的BMG以及新式的BioTek等品牌。各品牌都有各自的一个乃至多个系列商品线,特性各不相同,选购时各种技能参数、技能目标令人目不暇接。

这篇文章测验从用户实践运用的视点,讨论大概怎么看待花样繁多的参数特性,希望能协助我们找到真实适宜自个的多功用酶标仪。

一、滤片Vs光栅
多功用酶标仪的分类办法许多,但zui简略的莫过于用他们的滤光办法来作分界线。一般来说,可以分为滤光片型和光栅型两大类。当然也有一些类型,例如Synergy4和EnVision等,一台机器里边一同装上了滤光片和光栅。可是滤片和光栅并不能一同完结同一个检测,仍是想用光栅的时分用光栅,该用滤片的时分用滤片;还有一些试验非用其间一个不行,另一模块完结不了的。所以这类仪器实质上还仅仅把滤片和光栅放在了一同,并没有使两者糅合而发作新的技能打破。
整体来说,滤片技能因为开展已久,合作二向色镜(其实也即是另一形式的滤光反光滤镜)等光路体系,可以完结大多数试验的需求。当前惯例多功用酶标仪中zui高的检测灵敏度即是用滤光片型做出来的,例如TECAN Infinite F500的荧光检测的灵敏度可以到达0.04 fmol/孔(荧光素,384孔/80ul)。
可是滤光片型仪器因为受限于滤片的波长和数量约束,不行能满意日益添加的试验类型的检测需求,并且有时需求对物质的吸收、激起和发射光谱进行研讨,所以后来就诞生了光栅型的仪器。
zui先推出光栅的是MD公司,其光栅习惯上称为单光栅。因为光纯度的缺乏,在光栅的后边又参加了一组带阻滤片,再把杂光过滤一遍,到达了5×10-4的杂光率,根本与朴实的滤光片体系共同。后来TECAN又开展出了双光栅技能,经过两次光栅滤光,杂光率降到了10-6。后来,Thermo、BioTek和PE的有些新款仪器等都运用了相似双光栅技能。因为激起和发射各用了一组双光栅,此类机器又被称为四光栅型多功用酶标仪。
光栅型酶标仪的移风易俗,使得用户在波长挑选上不再受限,并且在杂光率、带宽操控等功用上还逾越了滤光片体系。例如,TECAN公司在2008年末推出运用了第三代四光栅体系的M1000酶标仪,杂光率降到了2×10-7的新低,还完结了带宽2.5~20nm接连可调。这些都是当前滤光片型酶标仪所不能或许较难完结的。

二、杂光率&波长精确性
光栅型滤光体系俨然现已变成了当前通用性多功用酶标仪的干流,多家厂家共同努力,现已把光栅技能推到了前史新高。在光栅的许多技能参数之中,zui要害的无疑即是光栅的杂光率和波长挑选的精确性了。
杂光率指得即是光源经过光栅后,得到的光线中,“不需求”的波长的光占所标称波长的光的份额,表征了滤光的纯度。因为光线干与、衍射等的复杂性,无论运用滤光片仍是光栅,杂光都是不行避免的。各种滤光技能的实质即是要想办法把杂光尽可能地去掉。一般来说,滤光片型的杂光率在10-4~10-5之间,光栅型的可以做到10-6~10-7。因为此类杂光是非特异的,并且会直接进入结尾的检测器,所以有多少的杂光就会引进多少的随机差错。在荧光等检测进程中,因为检测器存在扩大效应,杂光率的搅扰也会被指数级扩大。因而,杂光率即是一个滤光体系的首要功用目标。
光栅的另一个重要目标即是波长挑选的精确性。因为许多检测是依赖于物质在某个波长的特征图谱。就像DNA/RNA的OD260浓度测定,实践检测波长违背260nm几个nm以上的话,OD值与结尾浓度之间的数学就会发作改动。因而,一组功用优秀的光栅体系,他的波长挑选精确性大概是在±0.5~1nm之间。波长违背过大有时就会影响到结尾成果的精确性。
这两个可谓是光栅乃至滤光片滤光体系zui要害的技能参数,直接影响到的是得到数据是不是是真实所要丈量的成果,是试验成果牢靠性的zui根本需求。

三、认证>参数
在确保检测牢靠的基础上,不一样仪器的下一个区别就体现在检测的灵敏度上面,这时大家关怀的即是仪器可以检测到多弱的信号。
灵敏度触及了整个光路体系的描绘和选料,很难说某一个部件会起决定性作用。可是有一点,在各种单功用检测项目中,光吸收检测用非扩大型的光电二极管、荧光检测用光电倍增管、发光检测用专门描绘的单光子计数光电倍增管,这三种不一样的检测器是各自检测范畴的优先挑选。
各单项检测的zui优成果都是用相应检测器完结的。当然也有的仪器出于本钱等思考,用一个检测器兼容多种检测形式,这在必定程度上也能完结试验需求,可是在功用上也会有所献身折中,无法完结各项检测都到达zui优化。
关于灵敏度的界说和检测规范,每个厂家都有各自的描绘,都会说自个是如何如何好,很难有一个直观的客观比拟。因而,某些试剂厂家就站了出来,对某些仪器的检测功用供给一个第三方的认证。
比拟常见的是发光检测范畴里边的Promega公司DLReady认证,荧光检测范畴的Invitrogen公司的LanthaScreen系列认证、Cisbio公司的HTRF认证、BellBrook试验室的Transcreener认证等等。这些认证首要是对于公司供给的某一类型的需求较高的试剂盒,涵盖了对检测仪器的各种功用需求,包含:检测办法是不是能用,灵敏度、线性规模、孔间搅扰等是不是满意需求等等。
若是需求做关联的试验,例如做Luciferase发光检测的就看看仪器是不是有DLReady认证、做TR-FRET的就看看HTRF认证、做FP就看看Transcreener认证,若是机器具有关联的认证,就可以阐明该机器在必定程度上可以较好地满意相似检测的各种需求,远比单单比拟一个灵敏度参数更能阐明疑问。因为一个试验能否做好并不是单单一个灵敏度就能表征的。
需求特别注意的是,LanthaScreen是一个系列的认证,涵盖了FI、FRET、TRF、FP等多个子项目,不一样仪器所经过的子项目是不一样的,需求上Invitrogen细心查询核对。
光栅型的仪器因为新技能近几年才逐步鼓起,受限于技能研制和仪器本钱,同一个价钱规模内的灵敏度等目标会略差于开展老练的滤光片机器。所以,在中档多功用酶标仪范畴,拿到了各种认证的光栅型仪器并不多见。而作为新一代光栅型酶标仪的代表作,TECAN M1000现已拿到了悉数上述四种认证,并且在灵敏度等单项功用上也现已逾越了不少的中高端滤片型酶标仪。
这阐明晰光栅型酶标仪的研制又进入了一个新的高度,除了在灵活性上取得了无可代替的作用外,还在检测灵敏度等方面也逐步代替传统的滤光片型酶标仪。光栅型是科研范畴多功用酶标仪的将来首要开展趋势;而滤光片型仪器也正在往单项功用更优的方面改善。

四、比色杯+微量检测
除了惯例的6~384/1536孔酶标板检测之外,有些仪器还附带了比色杯、微量检测板等的兼容功用。无论是运用立式比色杯、卧式比色杯仍是各种微量检测板,其意图都是给光程不固定的酶标板检测引进一个规范光程的概念。尽管酶标板检测也能经过光程校对等办法完结10mm光程OD值的换算,但这仅仅一个数学变换进程,检测差错累积较多,实践运用作用欠安。引进比色杯和微量检测板后,光吸收的检测光程就被固定在10mm或许0.5mm等的规范长度,OD值换算愈加简略和精确。附带了此类检测功用的酶标仪,相当于除了自身的多功用酶标检测之外,还能代替有些分光光度计的功用,使其功用愈加全部,仪器的性价比更高。

五、品牌与售后
不一样品牌的仪器往往功用侧要点有所不必。例如,PE公司因为在试剂范畴有较深见识,他们的酶标仪在合作运用他们的TRF系列检测试剂盒上作了多项优化,因而PE的酶标仪遍及来说在TRF范畴会有较多的特征功用和相对较高的功用目标。而像TECAN,就把研制的要点放在了四光栅的研讨方面,这些年相继推出了第二和第三代光栅型多功用酶标仪(M200、M1000),变成四光栅酶标仪范畴的领头羊。而像多功用酶标仪上参加比色杯、微量检测板等功用也是TECAN从用户视点思考作出的技能创新,后来此类技能都变成了Thermo、BioTek等品牌纷繁效法的目标。
结尾,无论是一台多好的酶标仪,脱离了杰出的售后服务体系也是难以正常运作的。本年,各家厂商都在中国国内设立了办事处乃至亚太区总部,有些商品还专门研制了中文版的软件和阐明书。这都阐明晰厂家对中国商场的注重。而正因为这种注重,无论是厂家直销仍是挑选署理分销,都会对国内的售后服务提出各自的需求和希望,zui根本的即是遍及仪器的使用工程师和维修工程师网络体系。
可以说,国内的各大城市里边,根本现已做到了有些品牌总有一个工程师在你身边。选购之前多与工程师沟通,充沛知道各家的功用专长和售后状况,重复比照,总能找到zui适合自个需求的一款多功用酶标仪。


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