朗伯-比尔定律

　　当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，一部分被介质吸收，一部分透射出介质，一部分被器皿的表面反射。

　　在吸光光度的分析中，通常将待测物溶液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中，此时反射光强度基本上是不变的，其影响可以忽略。

　　双波长测试法

　　根据朗伯-比尔定律，物质的浓度不同，对光谱的吸收也会不同。将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量分析的方法，称为分光光度法。为了扣除环境和杂质吸收的干扰，采用同一时间测量两个特征光谱，然后相减的方法，即双波长测试法来扣除环境的干扰。仪器用主波长测量出吸光度 A1，同时用副波长测量出吸光度 A2，差值 AC=A1-A2作为待测物溶液的吸光度，用来计算待测物含量。双波长测试法能有效去除样本混浊的干扰，有效抵消光源的波动和电路的噪声。在波长的选择时，应选择干扰因数对主副波长的吸光度影响尽可能接近的两个波长。