制备液相色谱法分离纯化刺萼龙葵中化感物质黄酮苷
次生代谢物质是指植物体内除糖类、蛋白质、脂类等生长发育必需的物质以外的有机物质,如生物碱、黄酮类等。这些次生代谢产物对植物抗病虫害,防御天敌,并通过化感作用提高种间竞争力等方面具有重要作用。刺萼龙葵,又名黄花刺茄(Solanum Rostratum),是一种入侵性极强的有毒杂草,其主要通过自身产生的化感物质对环境产生影响。
可见,采用合适的方法确定刺萼龙葵中的化感物质很有必要。经过调查和研究,刺萼龙葵中黄酮苷类物质是其产生化感作用的主要原因,因此本文建立双水相浮选-制备液相色谱法分离纯化入侵植物刺萼龙葵中的黄酮苷。在样品前处理部分,目标物采用双水相浮选的方法进行分离和富集。用PEG1000的乙醇溶液(w:w=1:1)作浮选溶剂,溶液p H为4,硫酸铵浓度为350 g/L,氮气流速为40 m L/min,浮选时间为30 min,浮选溶剂的体积为10 m L,浮选次数为2次,在室温下得到了目标物浓度较高的粗品;再采用制备液相色谱纯化浮选产物,收集两个色谱峰所对应的洗脱物,经分析型高效液相色谱检测,确定其纯度分别达到了98.1%和99.0%。用NMR和LCMS-IT-TOF鉴定其化学结构,得知化合物1为金丝桃苷,化合物2为紫云英苷、异鼠李素-3-o-半乳糖苷和异鼠李素-3-o-葡萄糖苷的混合物。之后,降低温度,更换色谱柱和流动相,再次采用制备液相色谱将化合物2进一步分离纯化,得到了纯度分别为93.8%,97.1%和99.2%的紫云英苷、异鼠李素-3-o-半乳糖苷和异鼠李素-3-o-葡萄糖苷。双水相浮选-制备液相色谱可以高效分离刺萼龙葵中黄酮苷类物质,该方法对于入侵植物中化感物质的研究和有效利用具有重要意义。
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