牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒制备与使用技巧
牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒的制备：
1、抗原表位的计算机筛选；
2、抗原的制备；
3、血清的采集；
4、间接ELISA方法的建立；
5、间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；
6、试剂盒的稳定性验证；
7、对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断戊肝病毒由猪向人传播。
牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒的使用：
1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。牛流行性腹泻病毒PCR-荧光探针试剂盒应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
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