纯化的基因组 DNA 的微球菌核酸酶消化实验
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 取 100 ug 基因组 DNA 加入到室温的核缓冲液 C 中,使终体积为 300 ug。准备 4~5 管此溶液。 重要提示:对于每个溶液,直到反应进行到第 4 步后再进行下一管的反应。 2. 加入 CaCl2 至终浓度为 3 mmol/L。 3. 加入 MNase 至 0.5、1、2、3 U/ml。剧烈地混合使酶均匀的分布(溶液可能有些黏稠),反应 3 min。 4. 将溶液转移到含有 50 ul 0.25 mol/L EGTA 预热到 68℃ 的管子中,68℃ 温育 10 min。 5. 将管子转移到冰块上。 6. 在 1.2% 的小型琼脂糖凝胶上上样 200 ng,电泳检测消化的程度。 7. 对于感兴趣的样品加入等体积的氯仿抽提一次。 8. DNA 的沉淀、定量和鉴定。 展开 |
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