反相高效液相色谱柱前衍生荧光检测法测定游离多胺
反相高效液相色谱柱前衍生荧光检测法测定游离多胺
摘 要 合成新型荧光试剂1, 22苯并23, 42二氢咔唑292异丙基氯甲酸酯(BCIC)作为柱前衍生化试剂,在Eclip se XDB2C8色谱柱上,通过梯度洗脱对5种多胺进行了分离和在线质谱定性。在乙腈中,以硼酸钠缓冲液(pH 9)为催化剂, 40 ℃下衍生反应10 min后获得稳定的荧光产物。激发和发射波长分别为λex = 333 nm,λem = 390 nm。采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式,实现了人尿中游离多胺的定性及定量测定。多胺的线性相关系数大于0. 9996,检出限为5. 3～9. 9 fmol。
关键词 高效液相色谱2质谱,荧光检测,柱前衍生,多胺, 1, 22苯并23, 42二氢咔唑292异丙基氯甲酸酯
多胺广泛存在于细菌、植物、动物组织和体液中。体液中多胺含量的增加,预示着某部分组织生长迅速,或者因恶性肿瘤而促成了多胺的增加。因此测定血液或者尿中多胺的含量可以作为临床诊断恶性肿瘤的一个依据[ 1 ] 。但是多胺在紫外2可见光区吸收极弱,光度法难以准确测定。目前高灵敏度测定多胺的方法是用荧光试剂对其进行柱前衍生。广泛应用的衍生试剂主要有92芴基甲氧羰基氯( FMOC) [ 2～5 ] 、22( 92蒽基) 乙基氯甲酸酯(AEOC ) [ 6 ] 、丹磺酰氯(DNS2Cl ) [ 7～10 ] 及邻苯二甲醛(OPA) [ 11, 12 ] ,但这些衍生方法检测灵敏度低,进样前需要预处理,费时费力。本实验合成了新的衍生试剂1, 22苯并23, 42二氢咔唑292异丙基氯甲酸酯对5种多胺进行柱前衍生,实现了快速准确的分离测定。衍生产物稳定,方法重现性好。
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