高效液相色谱仪检茶叶中咖啡碱的含量

高效液相色谱仪检茶叶中咖啡碱的含量；

1 原理

用高效液相色谱(HPLC)、C18柱和紫外检测器分别检测茶叶中的咖啡碱，并与标准系列相比较。

2 仪器 和用具

实验室常规仪器及下列各项：

2.1 高效液相色谱仪。

2.2 紫外检测器：检测波长 280 nm

2.3分析柱：C18（ODS柱）

2.4 剖析天平：感量 0. 000 1 kg

3 试剂和溶液

甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水。

3.1 氧化镁：剖析纯。

3.2高效液相色谱活性相：将600 ml甲醇倒入1400 ml，再蒸馏水，混合分离。

3.3咖啡因标准溶液：称取125毫克咖啡因（纯度不低于99%），加入乙醇：水（1:4）溶解，定容至250毫升。

使用标准溶液时，在标准溶液达到室温后，将2ml工人加入100mL作为工作液。

4 操作办法

4.1 取样

按 GB/T 8302的规则。

4.2 试样制备

按 GB/T 8303的规则。

4.3 测定步骤

4.3.1 试液制备

称取 1.0g（精确至0. 0001 g）磨碎茶样,置于500ml,烧瓶中.加4.5g氧化镁及300ml沸水，于沸水浴中加热，浸提 20min每隔5min摇动一次），浸提终了后立刻趁热减压过滤，滤液移入500mL容量瓶中，冷却后，用水定容至刻度，混匀。取部分试液通过。采用0.45um膜过滤。

4.3.2 色谱条件

4.3.2.1检测波长：紫外检测器，波长280 nm。

4.3.2.2 活动相：水：甲醇的体积分数为 7:3。

4.3.2.3 流速：0.5mL/min一1.5mL/min

4.3.2.4 柱温；40 C。

4.3.2. 5 进样量：10 uL~20ul

4.3.3 测定

精确汲取制备液10uL-20ul，注人高效液相色谱仪，并用咖啡碱规范液制造规范曲线，中止色谱测定。

5 结果计算

将试样的峰面积与标准试样的峰面积进行比较，用公式（1）计算试样的峰面积。

咖啡碱%=c1xlc/l2/M1xm1x1000x100

式中：

C1一 一测定液中咖啡碱含量ug;

L1一 一样品总体积mL;

L2— 进样体积uL;

M 逐一实验的质量，g;

m1.— 试样干物质含量，％ 。

取两次测定的算术均匀值作为结果，结果保管小数点后一位。