方案11.8 用10× 浓缩液配制培养基

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2019.10.20

实验方法原理	配制全成分培养基时，准备好几个盛有无菌去离子蒸馏水的容器，一个容器的容量至少要够用1~3 周。加浓缩培养基和其他成分，调整pH , 直接使用或放回冰箱。用于密封的培养瓶，含空气、低浓度 HCO₃^— 、大气 CO₂ 浓度和低缓冲力。
实验材料	UPW 培养基10×浓缩液谷氨酰胺牛血清抗生素青霉素链霉素 HEPES
试剂、试剂盒	NaOH
实验步骤	1. 将血清和谷氨酰胺解冻，置于超净工作台内。 2. 所有曾放入水浴锅的瓶子都要擦干净后再放入超净台。 3. 加人上述“无菌溶液”所列成分，加 HEPES 可能会增加缓冲能力，对于某些细胞系，在高细胞密度情况下如果产生很多酸性物质，培养瓶可使其排出。 4. 加人 1 mol/L NaOH ，使 pH 达到 7.2 （20°C ) , 孵育之后培养基的 pH 将上升至 7.4 (37°C )，但如果是第 1 次使用的配方，这个数值可能还需要通过滴定试验来检验。
注意事项	如果需要加人其他成分，而这些成分是用水配制的，，则加入前应先从已准备好的水中取出相同体积的水；如果这些成分溶解在等渗盐溶液中，则只要加入至终体积。因为血清是等渗的，所以血清也是加人至终体积，尽管这样做会稀释培养基的营养成分。在37°C 时要不断地平衡和检测pH , 随着温度的升高，CO₂的溶解度会降低，HEPES 的 pKa 也会发生变化。

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