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巯基怎么修饰到适配体上的

2023.1.30

线性DNA在纳米金表面上的构象为连接巯基的一端缠绕在纳米金表面,另一端与表面垂直向外伸展,随着表面探针容量的增加,每条DNA探针缠绕在纳米金表面上的长度不断减小,而同时向外延伸的尾部越来越长,这样就把巯基修饰到适配体上了。

纳米金表面保持被DNA碱基吸附包裹的低表面自由能状态上述构象可以描述为DILOT模型,对于核酸传感器探针设计和基于DNA杂交的纳米组装等应用具有重要的指导意义。是利用动态光散射测定组装过程中线性DNA或核酸适配体与纳米金复合物的水合粒径,结合吸附动力学,分别测定线性DNA或核酸适配体在不同表面包被量时在纳米金表面上的构象。

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巯基的检测方法:


1. RP-HPLC法测定巯基含量。

采用色谱柱Kromasil-C18 (250×4.6mm, 5μm),流动相A(0.1%TFA)和流动相B(甲醇)梯度洗脱:流动相B 40%~80%,0~10min,然后80% B保持5min,流速0.8mL/min,检测波长327nm,得到NTB标准曲线y=3.67059x+0.14123,回收率101.9%,RSD=l.17%,从而建立了一种高灵敏度巯基检测方法。

2. 采用分子荧光光谱法作为反应条件,用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基。

用OPA、丹酰氯、茚三酮与半胱氨酸反应,测其可见紫外吸收光谱及荧光光谱;在不同PH、温度、反应时间条件下,用OPA与半胱氨酸反应测其荧光度;分别吸收0.1mmol/L半胱氨酸溶液0、20、40、60、80、100μl,各加入10μlHO,室温下反应30min,然后加热蒸干,残渣用200μl OPA衍生液,定容至5 ml,4 min时测其荧光光谱。取pH8.4的硼酸缓冲溶液5μl,混合10次;加入OPA衍生液2μl,混合进样走HPLC。梯度条件:洗脱液B所占比例0min为0,17min线性增加至60%,17.5min线性增加至100%,20min洗脱结束。激发波长为340nm,荧光检测波长为450nm。

3.柱前衍生高效液相色谱-紫外检测法。

以tris(2-carboxylethyl)–phosphine (TCEP)为还原剂,7–fluorbenzo–2–oxa–1,3–diazole–4-sulfonate(SBD-F)为衍生剂,N-乙酰半胱氨酸为内标,C8色谱柱分离,流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液(pH =3. 0),梯度洗脱,385 nm处检测。线性范围为8. 3~1042. 6μmol/L,最低检测限为0.42μmol/L,日内精密度为1.67%~1.86%,日间精密度为2.08%~3.06 %,平均回收率为98.1%~103.2 %。

4. 电化学脱附与荧光技术联用。

将样品固定在烷基硫醇自组装膜修饰的金电极表面,通过荧光试剂马来酰亚胺与游离巯基反应原位标记GSH,恒电位条件下脱附电极表面吸附物,检测脱附物在0.1 mol·L.KOH溶液中的荧光强度。

5.拉曼光谱法。

对于巯基在拉曼光谱方面研究主要集中在含巯基的芳香族化合物上,根据李晓伟等研究,巯基与银反应生成牢固的-SAg键,失去了原有的特征性巯基氢键,其光谱特点发生明显改变。


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