PCR拖尾及假阳性的原因及对策
拖尾
现象：产物在凝胶上呈Smear状态。
原因：
1.模板不纯
2.Buffer不合适
3.退火温度偏低
4.酶量过多
5.dNTP、Mg2+浓度偏高
6.循环次数过多
对策：
1.纯化模板
2.更换Buffer
3.适当提高退火温度
4.适量用酶
5.适当降低dNTP和镁离子的浓度
6.减少循环次数
假阳性
现象：空白对照出现目的扩增产物
原因：
靶序列或扩增产物的交叉污染
对策：
1.操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外；
2.除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管
及加样枪头等均应一次性使用。
3.各种试剂最好先进行分装，然后低温贮存
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