分析苯基尿素类杀虫剂的实验方法

　　色谱流动相的制备：

　　1M甲酸铵溶液：称取63g甲酸铵，溶于1L HPLC级的水中。

　　流动相A：在1L水 (HPLC级) 中加入5mL 1M 甲酸铵溶液。

　　流动相B：在1L甲醇 (HPLC级) 中加入5mL 1M 甲酸铵溶液。

　　样品制备（水果与蔬菜基质）

　　基于Anastassiadies等人提出的方法[1]：

　　1. 称量10g切碎的样品；

　　2. 加入100µL内标溶液(D5 -Atrazine 1µg/mL)；

　　3. 加入10mL乙腈，剧烈振摇；

　　4. 加入4g无水MgSO4和1g的NaCl；

　　5. 马上涡旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成；

　　6. 振摇30s后，4300r/min离心5min；

　　7. 取出1mL初提液，转移至含有150mg无水MgSO4的离心管中；

　　8. 混合，5200r/min离心1min；

　　9. 取出500µL上清液，用水将稀释到1mL，得到提取液浓度约为0.5g/mL

　　基于Klein和Alder等人提出的方法[2, 3]：

　　1. 在5g或10g样品中，加入水到10mL；

　　2. 加20mL甲醇，使用UltraTurrax 组织匀浆机匀浆2min；

　　3. 有时需要过滤或离心；

　　4. 加入NaCl溶液 (100mL水中含20g NaCl)，每6mL加入NaCl溶液2mL；

　　5. 用5mL样品溶液浸泡 ChemElut 柱；

　　6. 5min后，用16mL二氯甲烷洗脱；

　　7. 40℃挥发至干；

　　8. 用甲醇与水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL，水1mL) 重新溶解；

　　9. 用0.45µm滤膜过滤。

　　基于Lehotay et al.[4]提出的方法：

　　1. 使用Molinex 混合器或类似设备匀质水果或蔬菜样品；

　　2. 加入乙腈， (15.0 ± 0.05) g匀质的样品加乙腈15mL，超声提取2min后，混旋5min；

　　3. 加入6g无水MgSO4和1.5g NaCl的混合物，剧烈振摇1min；

　　4. 3000r/min离心5min；

　　5. 取5mL上层溶液，加入1.8g 无水MgSO4和0.3g Bondesil C8 吸附剂；

　　6. 振摇20s；

　　7. 使用Eppendorf 5301型浓缩仪，或类似设备挥发至干；

　　8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解样品；

　　9. 12000r/min 高速离心2min；

　　10. 上清液转入自动进样器的进样瓶中备用。

　　色谱分离条件

　　Agilent 1100 系统：G1312A二元泵系统、G1367A型自动进样器、柱温箱。

　　色谱柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，4µm，内孔 80Å。

　　流动相：A相—水+5mM甲酸铵；B相—甲醇+5mM甲酸铵。

　　梯度设置：

　　MS/MS 检测

　　API 3200™或3200 QTRAP® LC-MS/MS液质分析系统。TurboIonSpray® 离子源，负离子模式，MRM扫描方式。