荧光定量PCR检测HPV-DNA相关介绍
（一）荧光PCR HPV DNA检测
HPV感染是子宫颈癌及其癌前病变（子宫颈上皮内瘤样变）的主要病因。因此，可以将检测HPV感染作为子宫颈癌的一种筛查手段。HPV-DNA检测发现高度病变的敏感度为97.7%~100%，平均为98.6%，比细胞学检查高二十多个百分点。 如果将两者结合进行检查，敏感度可达100%。2000年在巴黎召开的“EUROGIN”子宫颈癌全球全球防御大会一致认为：HPV DNA检测是宫颈病变及宫颈癌筛查的最佳方法。2003年美国FDA将HPV DNA检测列为妇女常规检测项目。HPV DNA检测 在2002年被美国癌症协会指南采纳、2003年被美国妇产科学会指南采纳、2004年被美国妇科肿瘤学会指南采纳、2003年被中国宫颈癌筛查及早诊早治指引采纳。
荧光PCR DNA检测是HPV DNA检测技术中最有效最准确的宫颈癌早期检测手段。
（1）工作原理- 荧光定量PCR
在探针完好的情况下情况下，由于存在能量转移，其5’端荧光报告基团的荧光被3’淬灭剂所淬灭，当引物延伸时，由于Taq酶的核酸外切酶活性，荧光探针被切断，探针5’端荧光报告基团被释放，而且每合成一个DNA分子，就有 一个荧光信号被释放。被释放的激离报告荧光基团的数目和PCR产物是一对一的关系。
（2）临床应用
A、宫颈癌的筛查
HPV检测的阴性预测值为99.9％，可将筛查间隔延长至5年一次，由于降低的检查成本远远多于因采用HPV检测所增加的费用；
HPV阳性而细胞学涂片正常的妇女中10％会在4年内发展成CIN II或CIN III；B、辅助细胞学检查
通过HPV检测排除可疑的或低度病变（ASCUS），从而提高诊断的可信度。
ASCUS约占筛查人群的7-10％，大部分的HSIL在这些ASCUS中发现。
降低漏诊的风险。
把具有潜在患宫颈癌风险的妇女从低风险人群中区分出来，从而指导阴道镜的合理使用。
HPV检测提供更加客观、快捷的结果，可很信心地把HPV阴性的妇女重新放回常规筛查人群中。
C、手术后随访
可预测病变恶化或术后复发的风险，有效指导术后追踪。
手术后6个月、12个月HPV检测阴性，提示病灶切除干净，可最大限度减少病人的焦虑。
若术后HPV检测阳性，提示有残留病灶及有复发的可能性。
（3）临床诊断操作流程
（二）HPV检测方法比较
HPV检测方法有斑点印迹法、荧光原位杂交法、原位杂交法、Southern杂交法、荧光PCR法和杂交捕获法等，部分方法的优缺点总结如下表。
（三）宫颈癌的其他检测方法
（1）细胞学涂片——重要但不完美的筛查方法
A、巴氏涂片：是传统的宫颈涂片法，检查时用刮板在宫颈上刮取一些表层脱落细胞，然后在显微镜下观察以判别细胞的病变情况。
巴氏涂片检测分级：巴氏Ⅰ为正常；巴氏Ⅱ为炎症；巴氏Ⅲ为可疑癌；巴氏Ⅳ为癌可疑；巴氏Ⅴ为癌。
为什么说巴氏涂片检查"是成功的也是可悲的"？可以从下面几个方面理解：巴氏涂片的应用,使子宫颈癌的发生率下降70%~80%；但据1989年的报告,在美国每年为巴氏涂片筛查耗资高达60亿美元.相信到现在已远不止这个 数了；可是虽然有完善的细胞学筛查计划及大量资金支持,美国每年仍有14,000个宫颈癌新发病例,4,500个妇女死于宫颈癌。
B、薄层液基细胞学法：主要有ThinPrep和AutoCyte Prep两种，是传统巴氏涂片在标本采集和制片方面的改进。
薄层液基检测，采用TBS分类系统可分级为：阴性，在正常范围 ；良性细胞改变，无明确意义的非典型细胞，即：ASCUS ；低度鳞状上皮内病变（LSIL）；高度鳞状上皮内病变（HSIL）；癌细胞
C、PAPNET细胞学自动阅片系统：是细胞学阅片方面的改进，提高了细胞病理学家的工作效率和准确性。
宫颈细胞学涂片检查的局限性；检测敏感度低，尤其在提示腺体病变方面的敏感度更低；重复性差，同一张涂片由不同的细胞学大夫看，结果可以可以完全不一致；无法预测患病的风险性。对细胞学结果正常的妇女无法预测她半年 ，一年或二年后患病的风险性有多高；每年的检查，引起许多假阳性结果。而对这假阳性妇女的追踪，检查会导致大量资源的浪费。
在1995和1999年，美国发表了三个大型的，具有代表性的研究报告。在这三个研究中，对细胞学的敏感度进行评估，并显示细胞学的敏感度只有51%~66%，也就是说，在美国这样一个具有完善的细胞学质控系统的国家，其细胞学的漏 诊率也高达35%~50%。
（2）肉眼检查
指用化学溶液涂抹于宫颈使其染色后，不经任何放大装置，用普通光源照明，肉眼直接观察宫颈上皮对染色的反应，来诊断子宫颈病变。用3％－5％的冰醋酸染色的方法简称VIA。用5％的碘液染色的方法简称VILI。
研究表明，VIA对筛查绝经后的妇女很少有效，正如绝经后的妇女很难获得满意的宫颈涂片一样。同时其灵敏度和特异度均较低，假阳性和假阴性率较高，筛查出来的病例大部分已是浸润癌和早期癌而非癌前病变。
（3）阴道镜检查
阴道镜是一种内窥镜，可在强光源下用双目立体放大镜或电子监视器直接观察子宫颈和下生殖道上皮的病变，分为光学和电子两种，最大的优点是可发现肉眼看不见的亚临床病变，并在可疑病变处定位活检，从而提高活检的阳性率 和诊断的准确率，是早期诊断子宫颈癌及癌前病变的重要辅助方法之一。
但其敏感度和特异度均较低，尤其是特异度，不宜作为子宫颈癌的筛查方法。阴道镜与HPV检测或细胞学合用可减少假阴性的发生，并显著提高CIN和子宫颈癌的早诊率。
