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分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

流式细胞计量术（DNA含量）实验

2019.11.12

  • 固定全细胞的PI染色

  • 非固定细胞的无洗染色

           

实验材料

细胞

试剂、试剂盒

PBS 冷乙醇 PI 溶液

仪器、耗材

锥形管

实验步骤

1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮，1000 g 离心 5 分钟，弃上清。

2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次，计数细胞总数，记在管山。

3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬细胞。

4. 加 5 ml 冷乙醇，4℃ 固定过夜。

5. 取 5X106 细胞放入 15 ml 锥形管中，1000 g 离心，弃乙醇。

6. 悬搅沉淀，用 5 ml PBS+1% BSA 或小牛血清洗 2 次。

7. 用含 1% BSA 或 1% 小牛血清的 800 μl PBS 重悬细胞沉淀。

8. 加 100 μl 10X PI 溶液。

9. 加入 100 μl 煮沸过的 RNA 酶 A，37℃ 孵育 30 分钟。

10. 用流式细胞计量术分析固定的样品。

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