LC-MS/MS方法检测动物组织中β-兴奋剂类药物
卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》，上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现，包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂，同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障，上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法，现将LC-MS/MS检测动物组织中β-兴奋剂类药物的方法公布如下：
1. 适用范围
适用于动物组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺药物的检测。
2. 提取
将5g动物组织、15 mL乙酸乙酯、3 mL10%碳酸钠溶液置于50 mL离心管中，10000 rpm均质2 min。6000 rpm下离心2 min，将上清液转至另一离心管中。用15 mL乙酸乙酯重复提取一次，合并提取液。
向乙酸乙酯提取液中加入5 mL 0.1 mol/L的盐酸溶液，涡动1 min，然后再6000 rpm下离心1 min，收集下层水相。重复萃取一次，合并下层水相，用2.5 mol/L NaOH溶液调节pH至5.2，待净化。
3. 净化
活化/平衡：依次向Welchrom® P-SCX(60mg/3mL)中加入3 mL甲醇、3 mL水和3 mL 30 mmol/L盐酸溶液，流出液弃去;
上样：将上述提取液加入柱中，流出液弃去;
淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去，并将小柱抽干;
洗脱：用2×2 mL 5% 氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，40℃下氮气吹,50%乙腈复溶，过0.22μm滤膜，待分析;
4. 色谱质谱条件
4.1 色谱条件
色谱柱： Ultimate XB-C18 液相色谱柱(2.1mm* 100 mm, 3 μm)
流动相：
A: 0.1%甲酸水溶液
B：乙腈
梯度洗脱，程序见右图：
流速： 0.2 mL/min
进样量： 10 μL
柱温： 35 °C
运行时间：12 min
4.2 质谱条件
扫描模式：MRM
离子源：ESI+
毛细管电离电压：3.20 Kv
孔电压(cone)：45 V
电离源温度：100 ℃
脱溶剂温度：300 ℃
锥孔气流速：50 L/Hr
脱溶剂气流速：450 L/Hr
名称 母离子 子离子 孔电压 (V) 碰撞电压(eV)
驻留时间
(ms) 定量离
子对 定性离
子对
盐酸克伦特罗 277.2 167.8 20 28 100 - +
203.0 20 16 200 + -
莱克多巴胺 302.17 106.8 18 28 100 - +
164.1 18 14 200 + -
盐酸克伦特罗-D9 288.2 209.2 22 16 100 +
莱克多巴胺-D3 305.2 167.1 18 14 100 +
5. 结果
5.1 回收率和重现性实验
将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后，分别添加一定量的标准溶液，添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验，共3个批次(样品典型回收率色谱图见附图)。
图1 猪肌肉中添加0.1 mg/kg 盐酸克伦特罗EIC谱图 图2 猪肌肉中添加0.1 mg/kg 莱克多巴胺EIC谱图
本方法中使用到得耗材：
1. 固相萃取小柱 Welchrom® P-SCX 60mg/3mL (P/N:WSP020306)
2. 色谱柱：Ultimate XB-18,50*2.1mm，3μm(P/N:Ult3B18205)
3. 13mm，孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)
4. 12孔固相萃取装置(WEL-Vac-12)
