大黄酚抗衰老作用的实验研究
〔摘 要〕 目的 探讨大黄酚对小鼠抗衰老的作用。
方法 采用避暗实验,观察大黄酚对学习记忆的影响;通过常压耐缺氧、断头耐缺氧、亚硝酸钠中毒造成的缺氧以及负重游泳实验,观察大黄酚对小鼠缺氧及耐力的影响;以AlCl3造成急性衰老小鼠模型,观察大黄酚对小鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。
结果 大黄酚能明显改善记忆障碍、提高小鼠耐力、并且能明显提高急性衰老小鼠血中SOD活性。
结论 大黄酚具有一定的抗衰老作用。
〔关键词〕 大黄酚，抗衰老，学习记忆，耐力，超氧化物歧化酶
据报道,大黄有抗衰老作用 ,而大黄中有效成分之一的大黄酚 ( chrys ophanol, Chry)是否具有抗衰老作用国内外报道极少。我们在以前的研究中发现Chry能抑制肝、脑的脂质过氧化反应,减少丙二醛(MDA)的含量,因此,我们用学习记忆、耐力以及老化相关酶试验来进一步探讨 Chry的抗衰老作用。
1 资料与方法
1.1 动物 昆明种小鼠 , 8～10 w,雌雄兼用。
1.2 药品和试剂 Chry(中国药品生物制品检定所,实验前用溶剂配成所需浓度)。溶剂 (N,N2 二甲基甲酰胺∶吐温280∶ 生理盐水=1∶1∶8)。氧化物歧化酶(SOD)测试盒。
1.3 仪器 S BA2 2程控避暗箱,生物信号采集系统。
1.4 方法
1.4.1 大黄酚对学习记忆的影响 采用避暗法。
1.4.1.1 对东莨菪碱(scopolamine,scop)所致记忆获得障碍的影响
雌性小鼠55只,随机分5组,体重(24±2)g。训练前15min,生理盐水(NS)对照组腹腔注射(ip)NS011ml/10g,scop模型组及Chry+scop组ip scop3 mg/kg。并于训练前5min,NS组和scop组侧脑室注射(icv)溶剂对照液5μl,Chry+scop组分别icv100、10、1μg/ml的Chry 5μl,采用避暗箱训练3 min,24 h后测验记忆成绩,记录每只鼠进入暗室的潜伏期和3 min内错误次数。
1.4.1.2 对亚硝酸钠所致记忆巩固障碍的影响 雄性小鼠50只,随机分成5组,体重(25 ±3) g。小鼠采用避暗箱先训练3min后,NS对照组立即皮下注射(sc)NS 011ml/10 g,亚硝酸钠(NaNO2)模型组及Chry + NaNO2 组 ,立即 sc NaNO2 125 mg/kg,并且 NS组和亚硝酸钠模型组分别 icv溶剂对照液 5μl,Chry + NaNO2组分别 icv 100、 10、 1μg/ml的 Chry 5μl, 24 h后测验记忆成绩 ,记录每只鼠进入暗室的潜伏期和 3 min内错误次数。
1.4.1.3 对乙醇所致记忆再现障碍的影响 雄性小鼠60只,随机分成5组,体重(21±3) g。测验前15 min,NS对照组灌胃(ig)NS 011 ml /10 g,乙醇模型组及Chry+乙醇组ig 30%乙醇011ml/10g。每组小鼠采用避暗箱先训练3min,24h后进行测验。并于测验前5min, NS组和乙醇模型组icv溶剂5μl,Chry+乙醇组分别icv100, 10, 1μg/ml的 Chry 5μl,记录每只鼠进入暗室的潜伏期和3 min内错误次数。
1.4.2 大黄酚对小鼠耐缺氧及耐力的影响
1.4.2.1 对常压耐缺氧的影响 雌性小鼠56只,随机分成4组,体重 (32±2) g。对照组icv溶剂对照液5μl,给药组分别icv大黄酚 (100, 10, 1μg/ml) 5μl,注射后 5 min进行实验。参照文献方法〔3〕,取同组小鼠 2只,放在盛有30g钠石灰的广口瓶(250 ml)中,用凡士林密封,以5s内不再张口呼吸为观察指标。
1141212 对断头耐缺氧的影响 雌性小鼠 48只 ,随机分成4组,体重(27±2)g。分组和给药方法同上。参照文献方法〔3〕,迅速断头,观察小鼠张口呼吸时间 ,以5s内不再张口呼吸为观察指标。
1.4.2.3 对亚硝酸钠中毒缺氧的影响 雌性小鼠 40只,随机分成4组,体重(22±3) g。分组和给药方法同上。参照文献方法〔3〕,各组立即ip NaNO2 240 mg/kg,并开始记录,以 5 s内不再张口呼吸为观察指标。
1.4.2.4 对负重游泳的影响 雌性小鼠56只,随机分成4组,体重(32±1) g。分组和给药方法同上。参照文献方法〔3〕,记录小鼠的体重,给小鼠负重 10%体重的物体 ,系在其尾根部,将其放入水桶中游泳,水桶直径为30cm,水深20cm,水温27～28℃,自投入水内开始 ,记录小鼠沉入水底死亡的时间。
1.4.3 大黄酚对小鼠老化相关酶的影响 雄性小鼠50只,随机分成5组,体重 (18±2) g。NS对照组每天 sc NS 011 ml /10 g,AlCl3模型组及大黄酚+AlCl3组小鼠每天scAlCl370mg/kg,连续7d。参照文献方法〔4〕,同时NS组AlCl 3 70 mg/kgip, Chry+AlCl3组分别i p大黄酚10,1,011mg/kg连续18d,进行酶学实验。将小鼠的颈动脉切开取血,置于1ml的抗凝管(用2 U/μl肝素50μl湿润管壁,低于80℃烤干)中。4000 r/min,离心10min后取血浆10μl,采用羟胺法〔3〕以SOD试剂盒测定。规定每 ml反应液中 S OD抑制亚硝酸盐达 50%时所对应的SOD量为一个单位。
1.5 统计学处理 用 I NST AT2 2统计软件进行处理 ,以 x ±s表示。数据资料用 t检验,错误百分率用χ 2检验。
2 结 果
在本实验中,Chry各剂量组均能明显改善Scop所致的记忆获得障碍、亚硝酸钠所致的记忆巩固障碍和乙醇所致的记忆再现障碍,使小鼠进入暗室的潜伏期延长,错误次数减少,动物错误反应率降低,与模型组比较有显著性差异。在耐力实验中, Chry可显著延长小鼠耐常压缺氧时间、断头造成的急性缺氧时间、由NaNO2中毒所致缺氧的时间,并可显著延长小鼠负重游泳时间 ,与溶剂组比较有显著性差异,说明Chry能提高小鼠耐力,具有抗疲劳的作用。在老化相关酶实验中,AlCl3可明显降低小鼠血浆SOD活性(对照组为416±31,模型组为300±49,P< 01001) ,而 Chry各剂量组均可明显提高AlCl3所致急性衰老小鼠血浆 S OD活性 (Chry 10, 1, 011mg/kgSOD分别为366±72, 366±64, 388±67,P值分别为 P<0105, P< 0105, P< 0101)。
3 讨 论
学习记忆减退是衰老的重要指标之一。本实验结果表明,大黄酚(Chry)能明显改善东莨菪碱(Scop)所致的记忆获得障碍、NaNO2所致的记忆巩固障碍和30%乙醇所致记忆再现障碍,使小鼠进入暗室的潜伏期延长、错误次数减少、动物错误反应率降低 ,具有改善学习记忆的功能,机制有待进一步研究。衰老过程中,动物自身退行性变化逐渐增加,对环境的适应能力减弱。在本实验中给予小鼠以恶性刺激,即缺氧和负荷实验来观察小鼠对环境变化的适应能力。结果表明,Chry具有明显的抗缺氧和提高小鼠耐力、抗疲劳的能力,可能与其扩血管作用有关。随着增龄,人体内SOD活性下降,进而引起神经元细胞膜损伤,导致脑记忆功能下降。本实验用铝诱导急性衰老模型,是以铝中毒假说为基础的。结果显示,AlCl3模型组可明显降低小鼠血中SOD活性;Chry能明显提高血中SOD活性,清除过多的自由基,使脑神经元细胞膜免受过氧化脂质的损伤,从而起到抗衰老作用。
