填充色谱柱的制作
填充色谱柱的制作
管材: 玻璃管, 金属管和塑料管.
尺寸: 分析用的填充色谱柱管外径有3.18, 4.76和6.35mm三种; 供制备用的填充色谱柱管外径1-10cm; 色谱柱的长度都很少超过10m; 分析用填充色谱柱的长度大多在3m以内.
1.不同填充色谱柱尺寸条件下载体粒径和载气流量的选择
柱内径/mm | 短柱载体粒径/目 | 长柱载体粒径/目 | 氮气/ml.min-1 | 氢气/ml.min-1 |
|---|---|---|---|---|
| 100-120 | 80-100 | 8-15 | 15-30 |
注: 短柱长度大于3米, 长柱长度小于3米
2.色谱柱的试漏
将色谱柱浸在水中, 出口堵死通气, 在高于使用压力条件下不应有气泡冒出. 注意在清洗后还应试漏一次, 以防止因堵在漏洞处的污物被清洗后造成的泄漏.
3.色谱柱的清洗
玻璃柱: 可用洗耳球将K2CrO4.H2SO4洗液吸入, 浸泡一段时间后用自来水冲洗至中性后烘干备用.
铜柱: 用10%的盐酸溶液浸泡. 为了增加去污效果应用水泵抽洗, 直至抽洗液中没有金属, 铜锈或其他悬浮杂质为止, 然后用自来水冲洗至中性后烘干备用.
不绣钢柱: 用5%-10%的热NaOH的水溶液抽洗4-5 次, 以除去管内壁的油腻和污物, 然后用自来水冲洗至中性后烘干备用.
4.载体的选择
常用的载体有红色硅藻土载体, 主要用于分析非极性和弱极性化合物, 白色硅藻土载体, 主要应用于极性和碱性物质的分析, 非硅藻土载体如玻璃微球可分析甾族化合物, 氟载体耐腐蚀用于分析强极性化合物.
5.载体和固定液的用量
先依据柱长和柱内径计算所需载体的体积（V）, V=πr2L （r, L均以cm为单位）. 然后用量杯量取计算值V的1.2倍的载体在天平上称量质量（m=V/ρ）, 再按配比称取固定液的质量, 常用固定液的质量百分含量为5-30%.
6.溶剂的选择
所选溶剂应不和固定液发生化学反应, 但能和固定液形成无限互溶体系, 且容易挥发, 选择的依据是溶剂和固定液之间的相似相溶原理, 溶剂的用量为载体体积的0.8-1.0倍.
7.固定液的涂渍
浸渍法: 将固定液溶于适量溶剂中, 待完全溶解后, 迅速倾入载体, 轻轻搅拌均匀, 用红外灯加热使溶剂缓慢挥发. 使用低温固定液时, 尽量使溶剂缓慢自然蒸发.
回流法: 难溶解的固定液可与溶剂回流加热至溶解, 然后倒入载体加热回流1.5-2 h, 倒出使溶剂挥发掉, 其中的载体在配置前应先烘干.
减压抽滤涂渍: 在吸滤瓶中放入10ml液相溶液, 加20 g载体. 用水泵抽吸滤瓶几分中, 然后停止抽吸, 放置15分钟. 将吸滤瓶中的物质倒入烧结玻璃漏斗中, 抽真空15分钟后将载体分散在滤纸上干燥, zui后在80-l00℃的烘箱中干燥, 熔点低的溶液应在室温下干燥.
8.固定相的装填与成型
固定相的装填应紧密, 均匀, 不能存在沟槽和断裂, 同时柱端的死体积要小, 装填过程中还应防止载体破碎. 在链接色谱柱时, 一定要注意方向！把原来接真空泵的, 装填比较紧密的一端接检测器, 另一端接汽化室. 这样可以提高柱出口压力, 使载气的线速均匀, 柱效高, 若方向接反, 柱效将下降约10-20%. 常用的固定相的装填方法有
振动法: 将柱管直立, 一端塞上玻璃棉, 由上端漏斗加入固定相, 边装边敲, 装满后用玻璃棉（zui好经过硅烷化）堵死, 再加工成所需形状.
抽空法: 装填螺旋柱时可用有干燥装置的真空泵抽, 抽空时稍加振动, 柱一端堵好玻璃棉防止载体进入泵内.
9.色谱柱的老化
涂渍好的柱子, 使用前都需经过老化处理, 以除去制备柱子时可能产生的挥发性成分和不稳定物质. 老化温度一般应选在固定相最高使用温度之下, 实际操作使用温度之上, 老化时将制得的柱装在色谱仪上, 并将柱末端和检测器断开, 缓慢升温. 或者可选择在高于使用温度20-50℃的条件下通氮气老化至少6-8 h. 注意老化过程色谱柱出口不能接监测器以防污染.
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